Mir-195參與糖尿病腎病發(fā)病的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分STZ誘導(dǎo)的DBA/2小鼠早期糖尿病腎病miRNA表達(dá)譜分析
　　目的:建立小鼠1型糖尿病模型及早期糖尿病腎病模型,提取腎臟組織RNA并作microRNA芯片檢測(cè),分析糖尿病腎病中腎小球miRNA表達(dá)譜差異。
　　方法:STZ腹腔注射誘導(dǎo)DBA/2小鼠I型糖尿病和糖尿病腎病,記錄血糖,血肌酐,尿素氮,24小時(shí)尿微鼉白蛋白。取左腎做病理切片行光鏡和電鏡觀察;分級(jí)篩網(wǎng)法分離腎小球,提取總RNA,分離短片段RNA,做miR

2、NA芯片測(cè)microRNA表達(dá),RT-PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果;用生物信息學(xué)方法分析miRNA表達(dá)譜差異及差異miRNA調(diào)控的主要功能。
　　結(jié)果:低劑量STZ誘導(dǎo)DBA/2小鼠出現(xiàn)持續(xù)高血糖和蛋白尿。μParaflo MicroRNA基因芯片結(jié)果與RT-PCR結(jié)果一致。生物信息學(xué)分析MicroRNA基因芯片結(jié)果提示DN模型中多種MicroRNA表達(dá)上調(diào)或下調(diào),MicroRNA-195調(diào)控BCL2基因可并參與細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過程。

3、>　　結(jié)論:在糖尿病腎病中MicroRNA-195表達(dá)發(fā)生了變化,MicroRNA-195可能參與了糖尿病腎病的病理生理過程。
　　第二部分Mir-195調(diào)控糖尿病腎病足細(xì)胞的機(jī)制
　　目的:觀察高糖培養(yǎng)下足細(xì)胞MicroRNA-195表達(dá)及MicroRNA-195對(duì)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響,探討糖尿病腎病模型中MicroRNA-195引起的足細(xì)胞損傷和尿白蛋白排泄間的關(guān)系。
　　方法:高糖培養(yǎng)永生化小鼠足細(xì)胞系,用Mi

4、croRNA-195擬似劑或拈抗劑刺激細(xì)胞,檢測(cè)凋亡相關(guān)基因、蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率,檢測(cè)細(xì)胞骨架變化和特異性功能蛋白表達(dá)。分析糖尿病腎病模型中腎小球MicroRNA-195表達(dá)和尿蛋白定量間的關(guān)系。
　　結(jié)果:高糖培養(yǎng)下的足細(xì)胞表達(dá)MicroRNA-195明顯增加。MicroRNA-195可以促進(jìn)足細(xì)胞凋亡。F-actin染色提示MicroRNA-195可以導(dǎo)致足細(xì)胞F-actin重排、細(xì)胞骨架改變。在DN模型中,微量蛋白尿期Mi

5、croRNA-195水平已開始上升。
　　結(jié)論:MicroRNA-195表達(dá)增加可促進(jìn)足細(xì)胞凋亡,損傷足細(xì)胞引起蛋白尿。MicroRNA-195有可能成為篩查早期糖尿病腎病的診斷指標(biāo)。
　　第三部分 Mir-195調(diào)控糖尿病腎病系膜細(xì)胞的機(jī)制
　　目的:觀察高糖培養(yǎng)下系膜細(xì)胞MicroRNA-195表達(dá)及MicroRNA-195對(duì)系膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響,探討糖尿病腎病模型中MicroRNA-195引起的系膜細(xì)胞損傷和

6、腎臟病理間的關(guān)系。
　　方法:高糖培養(yǎng)永生化小鼠系膜細(xì)胞系,用MicroRNA-195擬似劑或拈抗劑刺激細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞增殖、肥大、凋亡率和細(xì)胞吞噬能力。分析糖尿病腎病模型中腎小球MicroRNA-195表達(dá)和腎臟病理切片中腎小球直徑、系膜細(xì)胞積分、細(xì)胞外基質(zhì)積聚的關(guān)系。
　　結(jié)果:高糖培養(yǎng)組系膜細(xì)胞MicroRNA-195表達(dá)較低糖培養(yǎng)組低。MicroRNA-195抑制劑刺激使高糖培養(yǎng)條件下系膜細(xì)胞凋亡率下降且具有量效關(guān)系。