HDAC4對(duì)FOXO1的去乙?；谔悄虿∧I病發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病最具代表性的并發(fā)癥，也是導(dǎo)致終末期腎病最主要的原因之一。因此，糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制是許多科學(xué)研究者的研究熱點(diǎn)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多元醇通路的激活、腎素血管緊張素系統(tǒng)的活化、氧化應(yīng)激、蛋白激酶C通路的激活、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等均參與了糖尿病腎損傷。
　　組蛋白去乙?；?Histone Deacetylases，HDACs)家族是一組進(jìn)化保守的蛋白酶類(lèi)，通過(guò)維持組蛋白乙酰

2、化與去乙?；钠胶鈦?lái)調(diào)節(jié)染色體結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)，與細(xì)胞遷移分化，細(xì)胞增殖凋亡及炎性反應(yīng)等過(guò)程有密切關(guān)系。越來(lái)越多的研究表明HDAC介導(dǎo)的去乙酰化表觀遺傳修飾在糖尿病并發(fā)癥發(fā)展過(guò)程中起到重要作用。HDACs抑制劑己被發(fā)現(xiàn)對(duì)于糖尿病腎病具有治療作用，但是目前可用的抑制劑大多是非選擇性可同時(shí)抑制多種HDACs的抑制劑，而實(shí)際上不同的HDACs發(fā)揮不同的作用。因此，鑒別不同HDACs在糖尿病腎病發(fā)病中的特異性作用及開(kāi)發(fā)特異性的HDACs抑制劑至關(guān)

3、重要。足細(xì)胞是腎臟固有細(xì)胞，是腎小球?yàn)V過(guò)膜的重要組成部分，影響腎小球?yàn)V過(guò)率。足細(xì)胞的缺失已成為糖尿病腎病典型的早期事件。
　　本研究課題主要對(duì)HDAC4在糖尿病腎病中的表達(dá)變化及其在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮的作用及機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法:一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):選取體重為210-260g的雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和STZ誘導(dǎo)糖尿病腎病模型組。通過(guò)大鼠尾靜脈STZ注射誘導(dǎo)成模。飼養(yǎng)14周后，制作腎臟組織石蠟切片和電鏡標(biāo)

4、本進(jìn)行PAS染色及電鏡觀察足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)確定腎臟損傷程度;用免疫組織化學(xué)染色法和免疫組織熒光染色檢測(cè)HDAC4的表達(dá)和分布:用實(shí)時(shí)定量RT-PCR、Western blot檢測(cè)HDAC4表達(dá)的變化;并測(cè)定腎臟組織中致炎因子及生長(zhǎng)因子水平。
　　二、體外實(shí)驗(yàn):在足細(xì)胞中測(cè)定HDAC4的表達(dá)變化及其與FOXO1的相互作用和對(duì)足細(xì)胞凋亡的影響。
　　三、收集糖尿病腎病病人的腎活檢標(biāo)本。通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT-PCR和免疫組織熒光染色方法

5、檢測(cè)HDAC4和FOXO1在腎活檢樣本中的表達(dá)和變化。
　　結(jié)果:在糖尿病腎病大鼠模型中，發(fā)現(xiàn)腎小球存在明顯的基底膜增厚，足細(xì)胞足突融合、致炎因子和生長(zhǎng)因子的釋放及腎小球足細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白連續(xù)性的破壞，并存在明顯的生理和生化指標(biāo)的異常;通過(guò)Western blot、免疫組織化學(xué)和免疫組織熒光分析，HDAC4在正常腎臟中有表達(dá)，而在STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠模型的腎臟中表達(dá)顯著增加，并在臨床糖尿病腎病病人的腎活檢樣本中得到了確認(rèn)。

6、在體外實(shí)驗(yàn)中，高糖刺激能誘導(dǎo)足細(xì)胞HDAC4的表達(dá)，而對(duì)FOXO1的蛋白水平則無(wú)明顯影響;通過(guò)免疫共沉淀方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，高糖刺激增強(qiáng)HDAC4與FOXO1的相互作用;Western blot檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)高糖刺激和HDAC4水平影響FOXO1的乙酰化水平;另外流式細(xì)胞術(shù)和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)高糖刺激、HDAC4和FOXO1水平均影響足細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。
　　結(jié)論:HDAC4在糖尿病腎病大鼠模型與臨床糖尿病腎病活檢