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文檔簡介
1、樹突狀細胞(DC)是最強的抗原提成細胞,未成熟DC具有識別和攝取抗原的作用,而只有成熟DC才具有提成抗原的作用。成熟的DC細胞可以激活T淋巴細胞,使T淋巴細胞向Th2方向轉(zhuǎn)化,并且分泌細胞因子如IL-4、IL-5、IL-13等。而Th1細胞分泌的細胞因子主要是IL-2、INF-γ、TNF-β等。目前普遍認為哮喘是由Th2細胞占優(yōu)勢的的過敏反應。在DC的成熟過程中,酪氨酸蛋白激酶SyK起著關(guān)鍵作用,若沒有SyK,則DC細胞不能成熟,也就不
2、能發(fā)揮抗原遞呈的功能,參與哮喘的各種細胞因子也就不能被炎癥細胞所分泌。所以,靶向阻斷酪氨酸蛋白激酶SyK有望成為治療支氣管哮喘的新途徑。
我們使用化學合成的21-23bp的小鼠樹突狀細胞酪氨酸蛋白激酶SyK基因RNA片段,以Lipofactomin2000作為轉(zhuǎn)染試劑,將合成的RNA片段轉(zhuǎn)染進哮喘小鼠樹突狀細胞,作用48小時后再與正常小鼠脾臟來源的T淋巴細胞混合反應48小時,之后用ELISA檢測細胞因子IL-4、IL-13
3、、IL-2、INF-γ。用Western Blot檢測酪氨酸蛋白激酶SyK的含量,從而檢測SyK基因是否被沉默。結(jié)果顯示,siRNA干擾組幾乎檢測不到小鼠樹突狀細胞酪氨酸蛋白激酶SyK的,siRNA干擾組IL-4、IL-13的水平較對照組明顯下降,數(shù)據(jù)均有統(tǒng)計學意義。本實驗采用siRNA的方法沉默了酪氨酸蛋白激酶SyK的基因表達,阻斷了DC的成熟,使之不能發(fā)揮抗原遞呈功能,本次實驗證實此項作用。
在這項研究中使用siRNA
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