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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在研究外周炎癥時(shí),通過(guò)改變下丘腦弓狀核(hypothalamic arcuate nucleus,ARC)區(qū)的Src酪氨酸蛋白激酶的表達(dá),觀察NMDA受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)的NR2B亞單位及相關(guān)信號(hào)分子如PKC、PKA、CaMKII的變化,探討Src對(duì)外周炎癥引起的痛覺(jué)過(guò)敏的影響。
方法:用完全弗氏佐劑(Complete Freund'sAdjuva
2、nt,CFA)建立大鼠外周炎癥模型;用Von Frey(VFF)法和熱輻射-縮腿法測(cè)定大鼠痛閾變化;用轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)(rota-rod test)測(cè)定大鼠的運(yùn)動(dòng)功能變化;用Western Blot方法檢測(cè)ARC區(qū)域NR2B,pNR2B(Y1472),Src,pSrc(Y416),PKA,PKCγ,pCaMKIIα(T286)的蛋白表達(dá);ARC內(nèi)微量注射NMDA受體抑制劑MK-801、含NR2B的NMDA受體抑制劑ifenprodil、PKC抑
3、制劑chelerythrine、Src抑制劑PP2或Src小發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA(shRNA)慢病毒,觀察CFA炎癥大鼠蛋白表達(dá)變化以及對(duì)大鼠痛覺(jué)過(guò)敏的影響。
結(jié)果:1、CFA炎癥大鼠在造模后1、3、5、7、14天痛閾顯著低于對(duì)照組大鼠(P<0.05或0.001),表現(xiàn)為熱輻射縮腿潛伏期縮短和VFF縮腿閾值降低,即出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏。2、與造模前比較,注射CFA后的1、3、7、14天,ARC組織內(nèi)的Src和NR2B無(wú)論是蛋白總量還是磷酸化
4、水平都明顯升高(P<0.05),PKCγ表達(dá)亦明顯升高(P<0.05);pCaMKIIα表達(dá)在1、3、7天明顯下降(P<0.05);PKA表達(dá)無(wú)明顯變化(P>0.05)。3、在造模后7天的大鼠ARC內(nèi)分別微量注射MK-801,ifenprodil,chelerythrine,或PP2,機(jī)械痛閾與熱痛閾均較對(duì)照組有不同程度的反轉(zhuǎn),在20min或30min時(shí)間點(diǎn)作用最大(P<0.05,0.01或0.001)。4、Src慢病毒下調(diào)外周炎癥大鼠
5、ARC內(nèi)Src、pSrc的蛋白表達(dá)(P<0.05,0.01或0.001);造模后3天,Src慢病毒組(LV-sh-src+CFA組)的NR2B、pNR2B、PKCγ蛋白表達(dá)較對(duì)照組(na?ve+CFA組或LV-sh-NC+CFA組)出現(xiàn)顯著下降(P<0.05或0.01);造模后7天,Src慢病毒組的pNR2B蛋白表達(dá)仍較對(duì)照組明顯下降(P<0.05或0.001);造模后14天,Src慢病毒組的NR2B、pNR2B、PKCγ表達(dá)與對(duì)照組比
6、較雖仍呈下降趨勢(shì)但已沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Src慢病毒組的PKA、pCaMKIIα表達(dá)與對(duì)照組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5、大鼠ARC內(nèi)感染Src慢病毒后,對(duì)外周炎癥誘發(fā)的機(jī)械痛敏有顯著影響,即造模后3、7、14天Src慢病毒組的機(jī)械痛閾與空載對(duì)照組相比顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Src慢病毒組的熱痛敏亦發(fā)生改變,即造模后3、14天Src慢病毒組的熱痛閾升高,與空載對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
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