下丘腦弓狀核Src酪氨酸蛋白激酶參與外周炎癥痛的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究外周炎癥時(shí)，通過(guò)改變下丘腦弓狀核（hypothalamic arcuate nucleus，ARC）區(qū)的Src酪氨酸蛋白激酶的表達(dá)，觀察NMDA受體（N-methyl-D-aspartic acid receptor，NMDAR）的NR2B亞單位及相關(guān)信號(hào)分子如PKC、PKA、CaMKII的變化，探討Src對(duì)外周炎癥引起的痛覺(jué)過(guò)敏的影響。
　　方法：用完全弗氏佐劑（Complete Freund'sAdjuva

2、nt，CFA）建立大鼠外周炎癥模型；用Von Frey（VFF）法和熱輻射-縮腿法測(cè)定大鼠痛閾變化；用轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)（rota-rod test）測(cè)定大鼠的運(yùn)動(dòng)功能變化；用Western Blot方法檢測(cè)ARC區(qū)域NR2B，pNR2B（Y1472），Src，pSrc（Y416），PKA，PKCγ，pCaMKIIα（T286）的蛋白表達(dá)；ARC內(nèi)微量注射NMDA受體抑制劑MK-801、含NR2B的NMDA受體抑制劑ifenprodil、PKC抑

3、制劑chelerythrine、Src抑制劑PP2或Src小發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA（shRNA）慢病毒，觀察CFA炎癥大鼠蛋白表達(dá)變化以及對(duì)大鼠痛覺(jué)過(guò)敏的影響。
　　結(jié)果：1、CFA炎癥大鼠在造模后1、3、5、7、14天痛閾顯著低于對(duì)照組大鼠（P<0.05或0.001），表現(xiàn)為熱輻射縮腿潛伏期縮短和VFF縮腿閾值降低，即出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏。2、與造模前比較，注射CFA后的1、3、7、14天，ARC組織內(nèi)的Src和NR2B無(wú)論是蛋白總量還是磷酸化

4、水平都明顯升高（P<0.05），PKCγ表達(dá)亦明顯升高（P<0.05）；pCaMKIIα表達(dá)在1、3、7天明顯下降（P<0.05）；PKA表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）。3、在造模后7天的大鼠ARC內(nèi)分別微量注射MK-801，ifenprodil，chelerythrine，或PP2，機(jī)械痛閾與熱痛閾均較對(duì)照組有不同程度的反轉(zhuǎn)，在20min或30min時(shí)間點(diǎn)作用最大（P<0.05，0.01或0.001）。4、Src慢病毒下調(diào)外周炎癥大鼠

5、ARC內(nèi)Src、pSrc的蛋白表達(dá)（P<0.05，0.01或0.001）；造模后3天，Src慢病毒組（LV-sh-src+CFA組）的NR2B、pNR2B、PKCγ蛋白表達(dá)較對(duì)照組（na?ve+CFA組或LV-sh-NC+CFA組）出現(xiàn)顯著下降（P<0.05或0.01）；造模后7天，Src慢病毒組的pNR2B蛋白表達(dá)仍較對(duì)照組明顯下降（P<0.05或0.001）；造模后14天，Src慢病毒組的NR2B、pNR2B、PKCγ表達(dá)與對(duì)照組比

6、較雖仍呈下降趨勢(shì)但已沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Src慢病毒組的PKA、pCaMKIIα表達(dá)與對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。5、大鼠ARC內(nèi)感染Src慢病毒后，對(duì)外周炎癥誘發(fā)的機(jī)械痛敏有顯著影響，即造模后3、7、14天Src慢病毒組的機(jī)械痛閾與空載對(duì)照組相比顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Src慢病毒組的熱痛敏亦發(fā)生改變，即造模后3、14天Src慢病毒組的熱痛閾升高，與空載對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。