雷帕霉素對大鼠腦缺血再灌注損傷后Cathepsin D、p-Akt表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　研究大鼠腦缺血再灌注損傷后溶酶體組織蛋白酶 D及 p-Akt表達(dá)的變化情況，并初步探討雷帕霉素干預(yù)處理后的腦保護(hù)作用相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　選擇清潔級10~12周齡、體重為280±20g的健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠100只，隨機(jī)分為正常組（n=10）、假手術(shù)對照組（Sham組，n=30）、腦缺血再灌注模型組（I/R組，n=30）和雷帕霉素干預(yù)組（Rap組，n=30）。采用改良Lon

2、g線栓法制備右側(cè)大腦中動脈梗塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，缺血2小時(shí)后恢復(fù)腦組織灌注，干預(yù)組在側(cè)腦室注射 Rap5μL（10 mmol/L）30min后行MCAO手術(shù)，Sham組及I/R組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室注射等量的DMSO溶液，Longa’s5級標(biāo)準(zhǔn)評分法進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能缺損評分，分別于缺血再灌注后3、6、12、24及48小時(shí)處死動物。TTC染色法觀察腦組織的病理學(xué)變化，末端標(biāo)記

3、法（TUNEL法）原位檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡，免疫組織化學(xué)法分別檢測缺血側(cè)頂葉大腦皮層的Cathepsin D、p-Akt蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　一、本實(shí)驗(yàn)造模成功率為72.29％，與I/R組相比，Rap組各時(shí)間點(diǎn)動物模型神經(jīng)功能缺損評分均有明顯改善（P<0.05）。
　　二、TTC染色示再灌注損傷24小時(shí)后白色缺血梗死灶主要位于腦組織皮層和基底節(jié)；正常組及 Sham組大鼠均未見梗死灶，I/R組梗死灶明顯，Rap干預(yù)

4、后腦梗死體積較前明顯縮?。≒<0.05）。
　　三、正常組及 Sham組可檢測到少量的凋亡細(xì)胞；I/R組凋亡細(xì)胞表達(dá)呈時(shí)間依賴性，再灌注6小時(shí)凋亡細(xì)胞明顯增多，并隨時(shí)間點(diǎn)延長逐漸增高，48小時(shí)達(dá)高峰；Rap干預(yù)后，再灌注6h、12h、24h、48h凋亡細(xì)胞數(shù)較I/R組均有較明顯減少（P<0.05），缺血再灌注后3h凋亡細(xì)胞數(shù)雖也有所減少，但 P>0.05。
　　四、正常組及Sham組可以檢測到Cathepsin D蛋白的少量

5、表達(dá)，I/R組Cathepsin D蛋白表達(dá)6小時(shí)開始上升，24h達(dá)到高峰，48h仍保存高水平，與模型組比較，雷帕霉素干預(yù)組Cathepsin D蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均明顯減弱（p<0.05）。
　　五、正常組及Sham組頂葉皮層可見少量p-Akt蛋白的表達(dá)；I/R組3h缺血側(cè)p-Akt蛋白的表達(dá)達(dá)高峰，隨時(shí)間延長逐漸降低，與正常組及假手術(shù)組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Rap干預(yù)后，缺血再灌注后3小時(shí) p-Akt蛋白表達(dá)與