2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅女性的健康。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,高水平雌激素長期刺激與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病關(guān)系密切,AT1-R子宮內(nèi)膜癌中存在過表達(dá),為此探討AT1-R在雌激素誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖、細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化中的作用及其對ERK1/2表達(dá)的影響。
   本實(shí)驗(yàn)采用免疫熒光技術(shù)檢測AT1-R在HEC-1A細(xì)胞中的表達(dá);脂質(zhì)體介導(dǎo)AT1-R-siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A,

2、經(jīng)G418選擇培養(yǎng),采用Westernblot檢測轉(zhuǎn)染前后HEC-1A細(xì)胞中AT1-R蛋白的表達(dá)。MTT法檢測無雌激素誘導(dǎo)及雌激素誘導(dǎo)10min轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期;Western blot檢測ERK1/2蛋白及ER蛋白表達(dá)水平。
   材料和方法:
   一、材料
   1、細(xì)胞系 ER低表達(dá)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院。
   2、試劑水溶性1

3、7β-雌二醇、四甲基亞唑藍(lán)(MTT)和碘化丙啶購自美國Sigma公司,AT1-R-siRNA由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司合成并進(jìn)行熒光標(biāo)記(AT1-RsiRNA正義鏈:5′GTATGCCTTCCTGTTTAAA3′),LipofectamineTM2000購自invitrogen公司,G418購自德國merck公司。
   二、實(shí)驗(yàn)方法
   免疫熒光技術(shù)檢測AT1-R在HEC-1A細(xì)胞中的表達(dá);脂質(zhì)體介導(dǎo)AT1-R-

4、siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A,經(jīng)G418選擇培養(yǎng),采用Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后HEC-1A細(xì)胞中AT1-R蛋白的表達(dá)。MTT法檢測無雌激素誘導(dǎo)及雌激素誘導(dǎo)10min轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期;Western blot檢測ERK1/2蛋白及ER蛋白表達(dá)水平。
   三、統(tǒng)計學(xué)分析
   所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析,P<

5、0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
   結(jié)果:
   1、免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)AT1-R表達(dá)于HEC-1A細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。
   2、轉(zhuǎn)染AT1-R-siRNA-GFP48h后在熒光顯微鏡下觀察,可見部分細(xì)胞呈綠色熒光,表示siRNA已成功轉(zhuǎn)染入HEC-1A細(xì)胞。經(jīng)G418篩選后擴(kuò)大培養(yǎng),穩(wěn)定傳代兩個月,獲得穩(wěn)定的細(xì)胞克隆HEC-1A-siRNA。
   3、Western blot檢測轉(zhuǎn)染組HEC-1A-s

6、iRNA細(xì)胞AT1-R蛋白表達(dá)水平較未轉(zhuǎn)染組明顯降低,AT1-R蛋白表達(dá)的抑制率為41.79%。
   4、MTT檢測17β-E2作用10min能夠誘導(dǎo)HEC-1A細(xì)胞增殖,其增殖率為14.74%,AT1-R沉默后再用雌激素誘導(dǎo),HEC-1A細(xì)胞增殖受到明顯抑制,其抑制率為29.34%。
   5、雌激素誘導(dǎo)10min能使HEC-1A細(xì)胞G1期細(xì)胞減少,S期細(xì)胞增多;AT1-R沉默后再用雌激素作用10min,與未轉(zhuǎn)染雌激

7、素作用組相比,E2促進(jìn)HEC-1A細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化作用受到明顯抑制,G1期細(xì)胞增加,S期細(xì)胞減少。
   6、雌激素誘導(dǎo)10min后,HEC-1A細(xì)胞ERK1/2蛋白表達(dá)水平升高;AT1-R沉默后再用雌激素誘導(dǎo)10min,ERK1/2蛋白表達(dá)較未轉(zhuǎn)染雌激素作用組顯著降低。
   7、雌激素誘導(dǎo)10min后,HEC-1A細(xì)胞ER蛋白表達(dá)無明顯變化;AT1-R沉默后再用雌激素誘導(dǎo)10min,ER蛋白表達(dá)也沒有受到抑制。
 

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