miR-375 靶向Sp1對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖及凋亡的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　探討miR-375對其下游潛在靶點Sp1的靶向作用，及其調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖及凋亡的分子機(jī)制，以期為子宮內(nèi)膜癌的臨床防治提供新思路。
　　方法：
　?。?）選取20例子宮內(nèi)膜癌組織及相應(yīng)癌旁組織，標(biāo)本均來源于國際和平婦幼保健院，采用RT-PCR檢測組織中miR-375的表達(dá)；
　　（2）選取上述組織，采用Western blot檢測其中蛋白Sp1的表達(dá)；
　?。?）選取子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-

2、1A，分別轉(zhuǎn)染miR-375mimic及control mimic，采用RT-PCR檢測細(xì)胞中miR-375表達(dá)；
　?。?）選取子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A，分別轉(zhuǎn)染miR-375mimic及control mimic，采用western blot檢測Sp1蛋白表達(dá)；
　?。?）選取子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A，分別轉(zhuǎn)染miR-375mimic及control mimic，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖；
　?。?）選取子

3、宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A，分別轉(zhuǎn)染miR-375mimic及control mimic，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡；
　　（7）分別將野生型Sp13’-UTR質(zhì)粒（Sp1-wt）和突變型Sp13’-UTR質(zhì)粒（Sp1-Mut）與miR-375mimic或control mimic共轉(zhuǎn)染至子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A，采用雙熒光素酶報告基因檢測細(xì)胞熒光素酶活性。
　　結(jié)果：
　　（1）與癌旁組織相比較，子宮內(nèi)膜癌組織中

4、miR-375表達(dá)明顯降低（P＜0.05）；
　?。?）與癌旁組織相比較，子宮內(nèi)膜癌組織中Sp1蛋白表達(dá)明顯增高（P＜0.05）。
　?。?）與轉(zhuǎn)染control mimic相比較，轉(zhuǎn)染miR-375mimic可使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A中miR-375表達(dá)增高（P＜0.05）；
　　（4）與轉(zhuǎn)染control mimic相比較，轉(zhuǎn)染miR-375mimic可使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A中Sp1蛋白表達(dá)降低（P＜0.

5、05）；
　?。?）與轉(zhuǎn)染control mimic相比較，轉(zhuǎn)染miR-375mimic可使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖活性顯著降低（P＜0.01）；
　?。?）與轉(zhuǎn)染control mimic相比較，轉(zhuǎn)染miR-375mimic可使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A總凋亡比例顯著增高（P＜0.05）；
　　（7）與轉(zhuǎn)染control mimic相比較，共轉(zhuǎn)染miR-375mimic與Sp1-wt可使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1