雌激素、胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌生長(zhǎng)的協(xié)同及交叉作用.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌(EC)是婦科三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病因?yàn)榧皺C(jī)制仍不明確。國(guó)內(nèi)外研究數(shù)據(jù)顯示EC發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。因此,對(duì)EC病因及發(fā)病機(jī)制的研究尤為重要。
　　 子宮內(nèi)膜癌的高危因素有肥胖、糖尿病、高血壓、長(zhǎng)期無(wú)孕激素對(duì)抗的雌激素刺激等。而肥胖、糖尿病、高血壓的共同的病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗及繼發(fā)的高胰島素血癥。雌激素作為性激素,除調(diào)節(jié)正常的生長(zhǎng)發(fā)育,維持女性性征外,還可作為生長(zhǎng)因子,促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和增殖。胰島素除

2、參與物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)外,課題組前期研究表明胰島素還可通過(guò)其下游的信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、抑制其凋亡。而高雌激素、高胰島素作為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病高危因素,二者在子宮內(nèi)膜癌增殖中是否具有協(xié)同及交叉作用,目前的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究將利用人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系探討雌激素與胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的協(xié)同及交叉作用。
　　 第一部分人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系雌激素受體α及胰島素受體β表達(dá)情況
　　 目的:探討人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系雌激素受體α及

3、胰島素受體β表達(dá)情況。
　　 方法：RT-PCR、Western blot方法檢測(cè)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa、AN3CA、HEC1-A、HEC1-B、KLE、ECC-1雌激素受體α(ER-α)及胰島素受體β(INSR-β)mRNA、蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa,、AN3CA、HEC1-A、HEC1-B、KLE、ECC-1均存在ER-α及INSR-β mRNA、蛋白表達(dá)。其中以Is

4、hikawa、ECC-1細(xì)胞系ER-α及INSR-βmRNA、蛋白表達(dá)相對(duì)較多,其它細(xì)胞系表達(dá)相對(duì)較少。
　　 結(jié)論：人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa、AN3CA、HEC1-A、HEC1-B、KLE、ECC-1存在ER-α及INSR-β表達(dá),具有雌激素及胰島素信號(hào)通路下傳的基礎(chǔ)。
　　 第二部分雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系的增殖作用
　　 目的:探討雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa的促增殖作用。
　　

5、 方法：采用MTT法檢測(cè)不同濃度17β-雌二醇(E2)對(duì)Ishikawa細(xì)胞系不同時(shí)間點(diǎn)的促增殖作用。實(shí)驗(yàn)分組:空白對(duì)照組,E210-10M處理組,E210-8M處理組,E210-6M處理組,E210-4M處理組,檢測(cè)E2處理后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)細(xì)胞增殖情況。
　　 結(jié)果：不同時(shí)間點(diǎn)E2對(duì)Ishikawa細(xì)胞的促增殖作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各濃度E2促細(xì)胞增殖作用兩兩比較,除0 mol/L與10-10mol/

6、L促細(xì)胞增殖作用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。之外,其余各濃度間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。72小時(shí)達(dá)最高峰,96小時(shí)增殖作用下降。
　　 結(jié)論:17β-雌二醇能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖,具有濃度依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。
　　 第三部分雌激素、胰島素促子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的協(xié)同及交叉作用
　　 目的:探討雌激素、胰島素促子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的協(xié)同及交叉作用。
　　 方法：針對(duì)ER-α及INSR-β基因序列,設(shè)計(jì)并合成SiRNA,采

7、用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法篩選有效沉默ER-α及INSR-β的序列。將血清饑餓的子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞分為不同處理組。①觀察胰島素(Ins)、E2對(duì)Ishikawa細(xì)胞增殖的協(xié)同作用,分組情況:空白對(duì)照組,10-6M Ins處理組；10-8M E2處理組；10-6M Ins加10-8M E2處理組；②觀察Ins、E2對(duì)Ishikawa細(xì)胞增殖的交叉作用,分組情況:ER-α干擾組；INSR-β干擾組；共轉(zhuǎn)染組；陰性對(duì)照組,各組分別分為空白組

8、,10-6M Ins處理組；10-8M E2處理組；10-6M Ins加10-8M E2處理組。MTT法檢測(cè)處理后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)細(xì)胞增殖情況。
　　 結(jié)果：SiRNA序列能有效降低ER-α及INSR-β mRNA及蛋白表達(dá)水平；Ins和E2共刺激組,Ishikawa細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)促增殖作用高于單獨(dú)刺激組；ER-α干擾后,明顯抑制了E248小時(shí),72小時(shí)對(duì)Ishikawa細(xì)胞的增殖作用；INSR-β干擾后,

9、明顯抑制了Ins48小時(shí),72小時(shí)對(duì)Ishikawa細(xì)胞的增殖作用；共轉(zhuǎn)染后,明顯抑制了E2和(或)Ins對(duì)Ishikawa細(xì)胞的增殖作用。
　　 結(jié)論：雌激素及胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖存在協(xié)同及交叉作用。
　　 綜上所述,人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系存在ER-α及INSR-βmRNA及蛋白表達(dá),具有雌激素及胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路下傳的基礎(chǔ)。雌激素能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖。雌激素與胰島素在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖中存在協(xié)同及交叉作用