茭白兩種內生真菌分離純化及培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、茭白（Zizania latifolia）為菰屬多年生草本植物，是我國第二大水生蔬菜。不僅營養(yǎng)豐富，同時具有保健和藥用價值。茭白膨大莖的形成與菰黑粉菌的侵染有密切關系，茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三種表型，這三種表型與黑粉菌在茭白體內的生長密切相關。當黑粉菌成功侵染茭白植株后，茭白莖部組織膨大形成肥大的肉質莖，即“正常茭”;如果植株能抵抗菰黑粉菌的侵染，從而開花結實，不長茭白的稱之為“雄茭”;若黑粉菌潛育期縮短，形成黑褐色的厚垣孢子堆，使

2、得茭白的肉質莖中充滿黑色斑點的則稱之為“灰茭”。研究表明，茭白在生產上若連續(xù)兩年不選種，雄茭、灰茭的發(fā)生率將達到30％左右，嚴重影響農民的經濟效益。
　　本課題以茭白為研究對象，研究茭白內生真菌的種類及其培養(yǎng)條件，主要如下:
　　(1)采用三點純化與單孢分離相結合的方法對茭白內生真菌進行分離純化，再通過分子生物學手段對其內生真菌進行菌絲DNA提取、真菌引物設計、目的片段PCR擴增、目的片段膠回收、T載體連接及相應質粒提取等一

3、系列手段，對所得內生真菌進行鑒定。通過測序得到兩個內生真菌長度為:627bp和618bp，測序結果表明，分離的兩種內生真菌為毛霉菌和煙管菌。
　　(2)以茭白內生真菌純化鑒定為前提，獲取毛霉菌純菌落，對純化后的茭白毛霉菌的培養(yǎng)條件包括培養(yǎng)基、接種量、pH值、轉速、溫度、時間進行系統(tǒng)篩選，得出茭白毛霉菌在接種量為3/50ml，pH為6.5，轉速為130r/min，溫度為28℃的改良馬丁培養(yǎng)基中生長良好，且生長到108h時達到最佳水平