大豆抗原蛋白引起仔豬腸道致敏損傷的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究.pdf

1、本試驗在斷奶仔豬日糧中添加β-伴大豆球蛋白或大豆球蛋白，旨在研究大豆抗原蛋白對仔豬腸絨毛形態(tài)及細胞器完整性、對仔豬腸道功能的影響，以及大豆抗原蛋白引起仔豬腸道致敏損傷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。
　　采用隨機分組設(shè)計，選擇40頭20日齡體況等指標相近、臨床檢查健康的“杜×長×大”三元雜交仔豬，隨機分成4組，每組10頭，分別為哺乳組、斷奶組、斷奶+大豆球蛋白組、斷奶+β-伴大豆球蛋白組。除哺乳組外，所有仔豬于21日齡斷奶，并開始飼喂含有大豆抗原蛋

2、白的飼糧，試驗期為7d。在仔豬20和27d，經(jīng)前腔靜脈采血，分離血漿及血清，用EHSA的方法測定二胺氧化酶(DAO)、caspase-3酶活性及NO、5-羥色胺(5-HT)、D-乳酸(D-LA)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。在仔豬27d，每組隨機選擇5頭仔豬進行宰殺，取十二指腸、空腸及回腸分成數(shù)份存放于多聚甲醛固定液、戊二醛固定液及液氮中，固定液中的組織用于免疫組織化學(xué)法（Immunohistochemistry，IHC）檢測小

3、腸中NF-κB、JNK、p38蛋白的表達以及電鏡觀察腸絨毛形態(tài)等，液氮中的組織用于qRT-PCR法檢測小腸中NF-κB、JNK、p38mRNA的相對表達量。
　　結(jié)果顯示:
　　1.電鏡觀察下，哺乳組腸絨毛密度高，排列整齊，斷奶組少量絨毛缺損，大豆抗原蛋白組仔豬腸絨毛則出現(xiàn)了不同程度的細胞器結(jié)構(gòu)損傷和細胞壞死。
　　2.在27d，與斷奶組相比，哺乳組仔豬血漿中D-乳酸、二胺氧化酶及5-羥色胺水平較低(P＞0.05)，其

4、中D-LA水平顯著降低(P＜0.05);大豆抗原蛋白組D-LA、5-HT及DAO水平均極顯著升高(P＜0.01)，其中大豆球蛋白組D-LA水平顯著高于β-伴大豆球蛋白組(P＜0.05)。
　　3.在27d，大豆抗原蛋白組仔豬血清中炎性因子NO、TNF-α水平均極顯著高于斷奶組(P＜0.01)，其中大豆球蛋白組NO水平顯著高于β-伴大豆球蛋白組(P＜0.05)，哺乳組與斷奶組之間差異不顯著(P＞0.05);大豆球蛋白組仔豬血清中ca

5、spase-3酶活性水平極顯著高于斷奶組(P＜0.01)，β-伴大豆球蛋白組仔豬血清中caspase-3酶活性水平極顯著高于斷奶組(P＜0.01)且顯著高于大豆球蛋白組(P＜0.05)，哺乳組低于斷奶組，但無顯著差異性(P＞0.05)。
　　4.與斷奶組相比，十二指腸及空腸中NF-κB mRNA相對表達量，哺乳組降低，但無顯著差異(P＞0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01);回腸中NF-κBmRNA相對表達量，哺乳

6、組顯著降低(P＜0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01)，其中大豆球蛋白組顯著高于β-伴大豆球蛋白組(P＜0.05);NF-κB蛋白表達與之有相似趨勢。
　　5.與斷奶組相比，十二指腸中.JNK mRNA相對表達量，哺乳組顯著降低(P＜0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01)，其中大豆抗原蛋白組極顯著高于β-伴大豆球蛋白組(P＜0.01);空腸中JNK mRNA相對表達量，斷奶組與哺乳組之間無顯著差異(

7、P＞0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01);回腸中JNK mRNA相對表達量，哺乳組降低(P＞0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01)，其中β-伴大豆球蛋白組極顯著高于大豆球蛋白組(P＜0.01);JNK蛋白表達與之有相似趨勢。
　　6.與斷奶組相比，十二指腸中p38mRNA相對表達量，哺乳組顯著降低(P＜0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01);空腸中p38mRNA相對表達量，哺乳顯著

8、降低(P＜0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01)，其中大豆球蛋白組顯著高于β-伴大豆球蛋白組(P＜0.05);回腸中p38mRNA相對表達量，哺乳組與斷奶組無顯出差異(P＞0.05)，大豆抗原蛋白組均極顯著升高(P＜0.01)，其中β-伴大豆球蛋白組顯著高于大豆球蛋白組(P＜0.05);p38蛋白表達與之具有相似趨勢。
　　試驗證實，β-伴大豆球蛋白及大豆球蛋白均能破壞仔豬腸絨毛完整性及細胞結(jié)構(gòu)，引起小腸損傷。同時