轉(zhuǎn)基因作物GT73油菜與59122玉米的PCR檢測技術(shù)研究.pdf

1、本研究以尚未建立轉(zhuǎn)化事件特異性檢測體系的轉(zhuǎn)基因作物GT73油菜和59122玉米為研究對(duì)象，主要研究內(nèi)容和結(jié)論有以下三個(gè)方面： 1．利用反向PCR(I-PCR)技術(shù)，熱不對(duì)稱交錯(cuò)PCR(TAIL-PCR)技術(shù)確定轉(zhuǎn)基因作物的側(cè)翼序列。結(jié)果表明，兩種方法都成功地分離GT73油菜的側(cè)翼序列，且兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)；反向PCR成功地分離59122玉米左右兩邊界的側(cè)翼序列。 2．根據(jù)側(cè)翼序列設(shè)計(jì)特異性引物，以轉(zhuǎn)基因作物種屬特異性基因

2、作為PCR擴(kuò)增的內(nèi)源參照，經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，建立轉(zhuǎn)化事件特異性定性定量檢測體系。結(jié)果表明，定性體系具有較好的特異性和靈敏度，GT73和59122的檢測限分別為0.05％和0.1％；定量體系具有較好的重復(fù)性，用標(biāo)準(zhǔn)分子確定的兩種轉(zhuǎn)基因作物的檢測限都可達(dá)到10個(gè)拷貝數(shù)。 3．利用重組PCR技術(shù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)分子，以標(biāo)準(zhǔn)分子作為定量PCR外部標(biāo)準(zhǔn)品并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測含有轉(zhuǎn)基因成分的混合樣品，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算轉(zhuǎn)基因成分的含量。結(jié)果表明，重組PC