縫隙連接Cx43在腦微血管痙攣中作用的體內實驗研究.pdf

1、目的：
　　縫隙連接（gap junction,GJ）在血管舒縮，尤其是在調節(jié)平滑肌方面發(fā)揮了重要作用，而縫隙連接蛋白（Cx）是縫隙連接發(fā)揮功能的基礎。我們課題組重點在Cx43參與蛛網膜下腔出血（SAH）后腦血管痙攣（CVS）的研究中，前期研究表明，Cx43主要通過調節(jié)血管的收縮參與SAH后CVS的進展.但影像學上的CVS和延遲性缺血性神經功能障礙（DIND）臨床表現并不完全相符，并且Cx43蛋白還廣泛存在于微血管，故本研究假設S

2、AH后微血管的痙攣與微血管中Cx43的表達密切相關。為驗證假設，本實驗通過使用二次注血的SAH大鼠模型，在動物體內研究Cx43的表達是否參與SAH微血管痙攣的調節(jié)及進一步深入了解其作用機制。
　　方法：
　　1、二次注血的SAH模型建立：用普通級SD大鼠，行腹腔麻醉，尾靜脈取血大概0.3ml備用，體式顯微鏡下枕大池穿刺，見有清亮腦脊液流出后，將尾靜脈血注入，次日同時間點進行二次注血，從而完成造模過程。
　　2、SD大鼠

3、模型分組：正常組、SAH3天、7天組和腺病毒預處理的SAH3天、7天組。采用western blot、免疫組化檢測各組大腦中動脈外側裂向頂葉部延伸段末側分支血管（直徑20～80um）Cx43的表達水平變化；HE染色光鏡下觀察血管的收縮形態(tài)、內徑變化、平滑肌細胞等相關病理變化。
　　3、活體熒光顯微鏡檢測：模型分組同上，通過尾靜脈注入FITC-Dextran（標記血小板），采用活體熒光顯微鏡檢測大腦中動脈分支微血管的直徑變化，對比分

4、析各組之間微血管的痙攣數量、痙攣程度。
　　結果：
　　1、成功建立二次注血SAH模型，通過光鏡觀察提示大腦中動脈分支微血管管腔狹窄、增厚程度不同、內皮細胞水腫、變形，平滑肌細胞變性壞死，排列紊亂，平滑肌層增厚。
　　2、Cx43的表達存在不同的變化，western blot檢測SAH后Cx43表達量在持續(xù)增加，在7d時達到一個峰值。而加入腺病毒預處理組Cx43表達量相對于SAH組有下降。免疫組化提示SAH后在內皮、平

5、滑肌、外膜層以看到明顯的棕黃染色的Cx43陽性表達，而腺病毒預處理組同SAH組比較，Cx43陽性表達量有所下降。
　　3、SAH組的血管痙攣數量和血管痙程度逐漸上升，在7day時達到高峰，腺病毒預處理組較SAH對照組血管痙攣數量和程度均有所下降。
　　結論：
　　1、SAH后微動脈上Cx43表達量逐漸升高，在7天達到峰值。
　　2、使用siRNA-Cx43腺病毒特異性下調Cx43表達能有效的減少微血管痙攣數量、緩