念珠菌對(duì)氟康唑耐藥性及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的：念珠菌為醫(yī)院感染的主要致病真菌，由于抗真菌藥的廣泛應(yīng)用，念珠菌感染所致的深部真菌病逐年增加，氟康唑作為重要抗真菌藥物之一，在臨床上取得了良好的治療效果，但耐藥菌株的出現(xiàn)也引起臨床的重視。
　　 本論文收集臨床耐藥菌株，調(diào)查深部念珠菌感染的菌種分布和對(duì)氟康唑的耐藥性，并對(duì)藥物靶酶基因(ERG11)和外排泵基因(MDR1)進(jìn)行初步研究，了解念珠菌對(duì)三唑類藥物耐藥的分子機(jī)制。為臨床合理使用抗真菌藥物提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　

2、 方法：收集2007-2008年臨床分離的白色念珠菌、熱帶念珠菌菌株各100株。采用M44-P酵母菌紙片擴(kuò)散法和E-Test法進(jìn)行氟康唑藥敏實(shí)驗(yàn)，保存對(duì)氟康唑耐藥菌株。
　　 采用PCR技術(shù)擴(kuò)增白色念珠菌氟康唑靶酶基因的ERG11，測(cè)序后比較序列差異，研究基因點(diǎn)突變與耐藥表型的相關(guān)性；應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)，檢測(cè)熱帶念珠外排泵基因MDR1表達(dá)量的差異，研究耐藥基因表達(dá)與氟康唑耐藥的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　

3、1兩種念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥性分別為：白色念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為5％(5/100)，熱帶念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為8％(8/100)。
　　 2白色念珠菌耐藥菌中產(chǎn)生ERG11基因的突變，其中10個(gè)為有義點(diǎn)突變，15個(gè)為無(wú)義點(diǎn)突變。10個(gè)有義點(diǎn)突變的氨基酸分別為F72L、F105L、D116E、K128T、Y132H、K147R、Y153E、P386L、S405F和D466N，其中P386L變異為本次實(shí)驗(yàn)中首次發(fā)現(xiàn)的點(diǎn)突變，有待進(jìn)