廣西眼鏡蛇毒細(xì)胞毒素-4N的分離純化及其對HSC-T6細(xì)胞ERK信號通路的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩84頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:為了獲得高純度的眼鏡蛇毒細(xì)胞毒素-4N(CTX-4N),探索眼鏡蛇毒中細(xì)胞毒素-4N對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)的增殖抑制作用和CTX-4N通過ERK信號通路對HSC-T6細(xì)胞凋亡的影響,從而闡明CTX-4N通過ERK信號通路誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
  方法:采用DEAE-Sepha roseCL-6B陰離子交換柱、SpehadexG-50凝膠層析柱、Macro-prep High S陽離子交換柱結(jié)合的方法對眼鏡蛇毒

2、蛋白進(jìn)行分離純化。采用HSC-T6增殖抑制實(shí)驗(yàn)對每一步分離后的各峰蛋白CTX-4N進(jìn)行活性檢測。收集活性最強(qiáng)的蛋白峰,在用聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定其純度。采用蛋白質(zhì)譜法鑒定其成分及分子量大小。用CCK-8方法檢測不同濃度的CTX-4N對HSC-T6的增殖抑制作用。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CTX-4N對HSC-T6細(xì)胞凋亡的影響。采用Western-Blot檢測CTX4-N作用HSC-T6細(xì)胞不同時(shí)間后,ERK信號通路中ERK1/2的磷酸化水平的

3、變化;以及在加入抑制劑PD98059處理HSC-T6細(xì)胞后,ERK信號通路中ERK1/2磷酸化水平的變化。抑制劑實(shí)驗(yàn)分組:空白對照組、CTX-4N組、抑制劑組和CTX-4N+抑制劑組。
  結(jié)果:通過DEAE-SepharoseCL-6B陰離子交換柱、SpehadexG-50凝膠層析柱、Macro-prep HighS陽離子交換柱分離純化后得到一個(gè)電泳純度的蛋白,蛋白質(zhì)譜鑒定為CTX-4N,分子量約為9.605 KDa。不同濃度的

4、CTX-4N對HSC-T6細(xì)胞具有增殖抑制作用,隨著濃度的增加而增強(qiáng),最小抑制濃度為2μg/mL,呈劑量-效應(yīng)關(guān)系,IC50為(12.836±0.045)μg/mL。不同濃度的CTX-4N對HSC-T6細(xì)胞的凋亡作用隨著濃度的增加而增強(qiáng),且誘導(dǎo)HSC-T6凋亡的最小濃度為4μg/mL。以4μg/mL的CTX-4N作用HSC-T6不同時(shí)間后,各時(shí)間點(diǎn)的ERK1/2蛋白表達(dá)沒有變化,而磷酸化ERK1/2蛋白的表達(dá)一開始是隨著作用時(shí)間的延長而

5、表達(dá)增加,作用10min后磷酸化ERK1/2表達(dá)水平最高,隨后就開始降低,到60min后其表達(dá)低于對照組。以10μ mol/L的PD98059和4μg/mL的CTX-4N作用HSC-T6細(xì)胞后,ERK1/2蛋白的表達(dá)沒有發(fā)生改變,而可以顯著的抑制磷酸化ERK1/2的表達(dá)。
  結(jié)論:廣西眼鏡蛇毒通過DEAE-SepharoseCL-6B陰離子交換柱、SpehadexG-50凝膠層析柱、Macro-prep High S陽離子交換柱

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論