阿司匹林對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2的抑制作用以及對(duì)Lgr5表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討非甾體抗炎藥阿司匹林對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2生長(zhǎng)增殖作用及其預(yù)防結(jié)腸癌發(fā)生的可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.無(wú)血清培養(yǎng)法富集Caco-2細(xì)胞中腫瘤干細(xì)胞;
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定Caco-2細(xì)胞CD24表達(dá);
　　 3.采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)阿司匹林對(duì)Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響;
　　 4.流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度藥物對(duì)Caco-2細(xì)胞凋亡的影響;
　　 5.

2、實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)Caco-2細(xì)胞中Lgr5和CD24mRNA的表達(dá);
　　 6.免疫組化Envison法檢測(cè)不同濃度藥物對(duì)Caco-2細(xì)胞中Lgr5蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.Caco-2細(xì)胞在SFM中可產(chǎn)生懸浮腫瘤球,加入SSM后細(xì)胞可再貼壁生長(zhǎng);
　　 2.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2中CD24為陰性表達(dá);
　　 3.MTT結(jié)果顯示阿司

3、匹林對(duì)Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制率逐漸增加,呈明顯的時(shí)間和劑量依賴性;
　　 4.AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)Caco-2細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示:阿司匹林對(duì)Caco-2細(xì)胞促凋亡作用（包括早期凋亡和總凋亡）呈明顯的劑量和時(shí)間依賴性,不同濃度組和時(shí)間組與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;
　　 5.RT-PCR結(jié)果顯示應(yīng)用阿司匹林干預(yù)不同時(shí)間后,Caco-2細(xì)胞中Lgr5mRNA的表達(dá)均較對(duì)照組降低,不同時(shí)

4、間組與對(duì)照組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;
　　 6.免疫組化結(jié)果顯示,Lgr5在結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2的細(xì)胞漿和細(xì)胞膜表達(dá),其中大部分定位于細(xì)胞質(zhì),少數(shù)定位于細(xì)胞膜,未見(jiàn)細(xì)胞核表達(dá);對(duì)照組和5mmol/L阿司匹林組平均光密度分別為0.191±0.031,0.182±0.041,5mmol/L阿司匹林組與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),10mmol/L和15mmol/L阿司匹林組可見(jiàn)細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均

5、被著色。
　　 結(jié)論:
　　 1.結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中可以生成懸浮的腫瘤細(xì)胞球;
　　 2.結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞CD24為陰性表達(dá);
　　 3.NSAIDs阿司匹林分別呈時(shí)間和劑量依賴性地抑制體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能是通過(guò)抑制Lgr5基因的表達(dá);
　　 4.Lgr5在體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜大量表達(dá),以細(xì)胞質(zhì)