脈痹通對(duì)骨橋蛋白在單側(cè)深靜脈不全結(jié)扎大鼠深靜脈中表達(dá)的影響及作用.pdf

1、目的：下肢深靜脈血栓形成(Deep venous thrombosis，DVT)是一種比較常見(jiàn)的疾病，其發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)。急性DVT所引發(fā)的肺栓塞是臨床猝死的常見(jiàn)原因之一，其遠(yuǎn)期并發(fā)癥對(duì)患者的勞動(dòng)能力及生活質(zhì)量有很大的影響。因此，防治DVT是是國(guó)內(nèi)外血管病研究者極為關(guān)注的課題之一。 脈痹通沖劑是河北省中醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合外科李永清教授臨床用于治療DVT的有效方劑，具有益氣活血，化瘀通脈，利濕消腫的功效。藥物組成為黃芪、當(dāng)歸尾、

2、三棱、莪術(shù)、地龍、浙貝母、云苓、澤蘭、澤瀉、銀花藤。本方針對(duì)氣虛、血瘀、濕阻而設(shè)，標(biāo)本兼治，尤其對(duì)于中后期之脈絡(luò)濕瘀證、脾虛濕阻證更為適用。前期臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其具有抗血栓的作用。 OPN是分布于細(xì)胞外基質(zhì)中的一種分泌型的磷酸化糖蛋白，一般正常的血管中不表達(dá)OPN，但在血管損傷發(fā)病過(guò)程中，OPN 顯著高表達(dá)，并且其表達(dá)水平與血管損傷后內(nèi)膜增生的程度呈現(xiàn)出明顯的相關(guān)關(guān)系。OPN能通過(guò)與其配體的相互作用，調(diào)節(jié)包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞

3、、血管平滑肌細(xì)胞等多種細(xì)胞的粘附和遷移，甚至影響到其增殖和凋亡。 研究表明DVT是一個(gè)十分復(fù)雜的病理過(guò)程，涉及到多個(gè)環(huán)節(jié)和眾多因素，本研究應(yīng)用免疫組化等研究方法，觀察脈痹通沖劑對(duì)骨橋蛋白(osteopontin，OPN)及巨噬細(xì)胞(M<,ψ>)相關(guān)因素的影響，以闡明脈痹通沖劑防治DVT的細(xì)胞分子機(jī)制。 方法： 1、動(dòng)物模型的建立：將72只SD大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(A組)24只，股靜脈不全結(jié)扎組(B組)24只

4、，脈痹通治療組(C組)24只。SD大鼠在新環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，后肢肌肉注射地塞米松磷酸鈉注射液(1mg/kg/d)，連續(xù)7d，第8d行股靜脈造栓。給藥方法：A組和B組用生理鹽水10ml灌胃，1/日；C組以脈痹通沖劑0.8g/kg/d灌胃，1/日。三組均于術(shù)前一天開(kāi)始灌胃至術(shù)后第1d、第3d、第7d和第15d。 2、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理：術(shù)后分別于第1、3、7、15d每組大鼠各取6只，將形成血栓的一段股靜脈連同其內(nèi)部的血栓一同切下，

5、投入10％中性福爾馬林固定液固定，48h后石蠟包埋，用于光鏡及免疫組化染色。 結(jié)果： 1、動(dòng)物的一般狀況：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中三組大鼠的一般情況良好，飲食正常，毛發(fā)平整，精神狀況良好。實(shí)驗(yàn)前后三組大鼠的體重基本上無(wú)多大變化，三組間無(wú)明顯差異。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠的體溫在正常范圍內(nèi)波動(dòng)，各次給藥后大鼠體溫沒(méi)有出現(xiàn)明顯的變化，三組間無(wú)明顯差異。 2、HE染色可見(jiàn)A組大鼠深靜脈管腔和血管內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)明顯變化。B組大鼠在第1、3、7、

6、15d深靜脈管腔和血管內(nèi)皮細(xì)胞明顯損傷，并可見(jiàn)到炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及血栓形成。C組較B組各時(shí)期相比明顯減輕。三組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 3、免疫組織化學(xué)結(jié)果 ①OPN的表達(dá)：A組各時(shí)期血管管腔、血管內(nèi)皮、中膜、外膜基本無(wú)OPN表達(dá)。B組及C組術(shù)后各時(shí)期OPN表達(dá)較A組明顯增加(P<0.01)，OPN主要分布在靜脈的內(nèi)膜及中膜平滑肌，外膜有少量表達(dá)。B組術(shù)后1d可見(jiàn)少量OPN表達(dá)，術(shù)后3d可見(jiàn)OPN表達(dá)明顯增多，術(shù)后7

7、dOPN表達(dá)達(dá)到高峰，15 d有所減少，各時(shí)期OPN表達(dá)均高于A組(P<0.05)。C組術(shù)后OPN表達(dá)變化趨勢(shì)同B組，但同時(shí)期相比OPN均明顯低于B組，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 ②血管巨噬細(xì)胞的表達(dá)：A組各時(shí)期偶可見(jiàn)到巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)。與A組相比，B組及C組各時(shí)期巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)較A組明顯增多(P<0.05)。B組術(shù)后1d可見(jiàn)少量單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，術(shù)后3d可見(jiàn)多量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，術(shù)后7 d巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增多，達(dá)到高峰，15

8、d有所減少，各時(shí)期巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)均高于A組(P<0.05)。C組術(shù)后巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度變化趨勢(shì)同B組，但同時(shí)期相比巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度均明顯低于B組，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 結(jié)論： 1、成功建立了大鼠單側(cè)深靜脈不全結(jié)扎的動(dòng)物模型。 2、隨著單側(cè)深靜脈不全結(jié)扎大鼠病情的進(jìn)展，血管OPN表達(dá)增多，可能在DVT中起重要作用。 3、OPN可能通過(guò)介導(dǎo)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)參與DVT，OPN可成為治療DVT的新靶點(diǎn)。