MNP-RT-PCR技術(shù)在結(jié)直腸癌和腺瘤性息肉篩查和鑒別中的應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　探討納米磁珠-實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(MNP-RT-PCR)技術(shù)在結(jié)直腸癌和腺瘤性息肉的糞便篩查中應(yīng)用的可行性，并與便潛血篩查方法作對(duì)比;同時(shí)探索應(yīng)用MNP-RT-PCR技術(shù)檢測(cè)腸鏡刷檢樣本中的COX-2的表達(dá)，用于結(jié)直腸癌、腺瘤性息肉和正常黏膜三組人群的鑒別中的可行性。
　　方法:
　　1、在2012年6-12月天津市篩查患者中通過(guò)確定的高危因素選取500例高?；颊?，到人民醫(yī)院行腸鏡下病理活檢進(jìn)行確診，其中

2、結(jié)直腸癌組13例、腺瘤性息肉組34例、其他組453例，其他組中正常黏膜組397例，其余為炎性腸病、炎性息肉、黑變病等患者。
　　2、在500例患者中分別取少量糞便（約1g），利用納米磁珠技術(shù)提取糞便中的總RNA，再利用RT-PCR技術(shù)特異擴(kuò)增總RNA中的COX-2，采用Ct值相對(duì)定量分析，即通過(guò)比較各組2-△△Ct值，間接得出各組表達(dá)量的差異。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)500例患者行MNP-RT-PCR方法所得結(jié)果進(jìn)行RO

3、C曲線分析，并作圖繪制成ROC曲線計(jì)算曲線下面積AUC，取敏感度+特異度的最高值所對(duì)應(yīng)的截?cái)帱c(diǎn)作為最佳篩查臨界點(diǎn)。此時(shí)可確定MNP-RT-PCR方法的靈敏度和特異度。同時(shí)利用膠體金便潛血法篩查此500例高危患者，計(jì)算此便潛血方法的靈敏度和特異度。比較兩種方法的靈敏度和特異度。
　　3、同時(shí)收集上述高危患者中的444例患者（結(jié)直腸癌組13例、腺瘤性息肉組34例、正常黏膜組397例），在腸鏡下刷檢病變部位（結(jié)直腸癌組和腺瘤性息肉組）或

4、正常部位（正常黏膜組），再用MNP-RT-PCR方法檢測(cè)COX-2表達(dá)量，進(jìn)而比較三組COX-2表達(dá)量的差異。
　　結(jié)果:
　　1、應(yīng)用MNP-RT-PCR技術(shù)對(duì)500例高危患者糞便中COX-2基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)直腸癌組COX-2表達(dá)量顯著高于腺瘤性息肉組(p＜0.05)和其他組(p＜0.05)，腺瘤性息肉組COX-2表達(dá)量顯著高于其他組(p＜0.05)。
　　2、應(yīng)用MNP-RT-PCR技術(shù)篩查高?；颊咧薪Y(jié)直腸癌

5、的靈敏度為76.9％，特異度為74.7％，篩查腺瘤性息肉的靈敏度為70.6％，特異度為76.0％;便潛血法篩查高?；颊呓Y(jié)直腸癌的靈敏度為61.5％，特異度為64.1％，篩查腺瘤性息肉的靈敏度為41.2％，特異度為63.7％。
　　3、MNP-RT-PCR法檢測(cè)高?；颊吣c鏡刷檢樣本中COX-2的表達(dá)量，結(jié)直腸癌組COX-2表達(dá)量顯著高于腺瘤性息肉組(p＜0.05)和正常黏膜組(p＜0.05)，腺瘤性息肉組COX-2表達(dá)量顯著高于正常

6、黏膜組(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、納米磁珠技術(shù)為一種有效的提取技術(shù)，提取的純度高、質(zhì)量好、操作簡(jiǎn)單、工作流程簡(jiǎn)短，RT-PCR技術(shù)的靈敏度較高，二者結(jié)合后使核酸的提取效率大大提高。
　　2、對(duì)于高?；颊咧薪Y(jié)直腸癌和腺瘤性息肉的糞便篩查，MNP-RT-PCR方法的靈敏度和特異度要高于便潛血，MNP-RT-PCR方法對(duì)于高?；颊咧薪Y(jié)直腸癌和腺瘤性息肉的篩查是有效的。MNP-RT-PCR方法所需的取樣量更小，而便

7、潛血更簡(jiǎn)單易行且費(fèi)用低。
　　3、MNP-RT-PCR技術(shù)通過(guò)檢測(cè)結(jié)直腸癌、腺瘤性息肉和結(jié)直腸正常粘膜中COX-2含量進(jìn)行鑒別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組COX-2的表達(dá)量顯著高于腺瘤性息肉組和結(jié)直腸正常粘膜組，腺瘤性息肉組COX-2的表達(dá)量顯著高于結(jié)直腸正常黏膜組。MNP-RT-PCR技術(shù)可用于結(jié)直腸癌、腺瘤性息肉和結(jié)直腸正常粘膜三者的鑒別。
　　4、COX-2含量在結(jié)直腸癌、腺瘤性息肉和結(jié)直腸正常粘膜三者中呈遞減關(guān)系，三者在發(fā)生