同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞穴位注射零天與七天治療急性心肌梗死兔的對(duì)比研究.pdf

1、目的：探討兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）穴位注射對(duì)缺血心肌細(xì)胞的修復(fù)重建能力，同時(shí)進(jìn)行兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）穴位注射零天與七天對(duì)梗死區(qū)心肌細(xì)胞凋亡的對(duì)比研究。采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)原位缺口標(biāo)記（TUNEL法）確定細(xì)胞凋亡數(shù)，免疫組化SABC方法及RT-PCR和蛋白印跡法觀察心肌細(xì)胞中Fas、FasL、Bcl-2蛋白及mRNA的表達(dá)。
　　 方法：
　　 1．將已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔隨機(jī)分為3組，模

2、型組、穴位注射干細(xì)胞零天組、穴位注射干細(xì)胞七天組。用開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左室支的方法建立急性心肌梗死模型，對(duì)梗死后的兔分兩組分別在零天與七天穴位注射相同數(shù)量的已經(jīng)分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、標(biāo)記后的MSCs懸液。在梗死后五周分別對(duì)各組兔心肌梗死區(qū)及周邊區(qū)進(jìn)行Brdu免疫組化染色以觀察穴位注射MSCs是否遷移至梗死區(qū)，對(duì)Brdu染色陽(yáng)性的細(xì)胞復(fù)染心肌特異性肌鈣蛋白T染色以觀察遷移的細(xì)胞是否分化及分化的性質(zhì)。
　　 2．采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介

3、導(dǎo)原位缺口標(biāo)記（TUNEL法）確定細(xì)胞凋亡數(shù)，免疫組化SABC方法及RT-PCR和蛋白印跡法觀察心肌細(xì)胞中Fas、FasL、Bcl-2蛋白及mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．穴位注射MSCs各組梗死區(qū)組織免疫組化Brdu染色陽(yáng)性；心肌特異性肌鈣蛋白T染色陽(yáng)性。
　　 2．免疫組化示：梗死區(qū)凋亡細(xì)胞的表達(dá)，模型組高于正常組、穴位注射干細(xì)胞零天組和穴位注射干細(xì)胞七天組，穴位注射干細(xì)胞七天組低于穴位注射干細(xì)胞零

4、天組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；Fas蛋白的表達(dá)，模型組高于正常組、穴位注射干細(xì)胞零天組和穴位注射干細(xì)胞七天組，穴位注射干細(xì)胞七天組低于穴位注射干細(xì)胞零天組；FasL蛋白的表達(dá)，穴位注射干細(xì)胞零天組高于正常組、模型組、穴位注射干細(xì)胞七天組；Bcl-2蛋白的表達(dá)，模型組低于正常組、穴位注射干細(xì)胞零天組和穴位注射干細(xì)胞七天組，穴位注射干細(xì)胞七天組高于穴位注射干細(xì)胞零天組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3． RT-PCR與Western Blot顯示

5、：與正常組比較，F(xiàn)as mRNA水平：模型組和穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高；FasL mRNA水平：模型組和穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高；Bcl-2 mRNA水平：模型組明顯下降，穴位注射干細(xì)胞的兩組有所升高，但升高程度不同，穴位注射零天組明顯升高，穴位注射七天組雖有升高但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較，F(xiàn)as mRNA水平：穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降；FasL mRNA水平：穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降；Bcl-2 mRNA：穴位注射干

6、細(xì)胞的兩組明顯升高。與穴位注射干細(xì)胞零天比較，F(xiàn)as mRNA水平：穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降；FASL mRNA水平：穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降；Bcl-2 mRNA水平：穴位注射干細(xì)胞七天組也明顯下降。與正常組比較，F(xiàn)as與FasL蛋白水平：模型組和穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高；Bcl-2蛋白水平：模型組明顯下降，穴位注射干細(xì)胞的兩組有所升高，但升高程度不同，穴位注射零天組明顯升高，穴位注射七天組明顯升高。與模型組比較，F(xiàn)as蛋

7、白：穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降；FasL蛋白：穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降；Bcl-2蛋白：穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高。與穴位注射干細(xì)胞零天比較，F(xiàn)as蛋白：穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降；FASL蛋白：穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降；Bcl-2蛋白：穴位注射干細(xì)胞七天組也明顯下降。
　　 結(jié)論：
　　 1．穴位注射兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可遷移至梗死區(qū)，并可以在梗死區(qū)分化為類(lèi)心肌樣細(xì)胞。
　　 2．穴位注射骨髓間充質(zhì)