降脂益肝沖劑對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織環(huán)氧合酶2mRNA表達的影響.pdf

1、目的：采用高脂高膽固醇飲食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型，動態(tài)觀察大鼠肝組織中環(huán)氧合酶2mRNA的表達情況，對環(huán)氧合酶2在NAFLD發(fā)病機理中的作用進行初步探討，同時觀察降脂益肝沖劑對肝組織環(huán)氧合酶2mRNA表達的影響，探討其可能的分子治療機制，為其更廣泛的臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法：1．動物模型的建立及標本的采集：48只雄性Wistar大鼠正常喂養(yǎng)一周后，隨機分為對照組(N組)：給予普通喂養(yǎng)；模型組(M組)，用藥組(D組)：給予

2、高脂飼料(85％普通飼料，13％的豬油和2％的膽固醇)喂養(yǎng)。每組16只，分別設8周、12周二個時相點，每個時相點各8只大鼠，相對應的組別為N1、N2，M1、M2和D1、D2組。D1、D2組分別于實驗開始和第8周末，給予降脂益肝沖劑1ml/100g，以0.8g/ml的濃度溶解灌胃，每日兩次，分別持續(xù)8周，4周。同時M組和N組分別給予等量的生活飲用水灌胃。實驗結(jié)束后分階段處死各組大鼠，腹主動脈采血，迅速取出肝臟，按常規(guī)制備血清、肝勻漿以及肝

3、組織切片，并留取少量肝組織于-70℃低溫保存。 2．檢測指標：稱體重；全自動生化分析儀測定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血脂及肝組織脂質(zhì)含量，銅染色法測定血清和肝組織FFA水平；比色法測定血清和肝組織GSH含量，黃嘌呤氧化酶法測定血清和肝組織SOD活性；硫代巴比妥酸法測定血清和肝組織MDA含量；光鏡下評估脂肪變性和炎癥活動情況；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT—PCR)測定肝組織環(huán)氧合酶2mRNA的表達。

4、結(jié)果：1．N組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝索圍繞中央靜脈呈放射狀分布，細胞呈多邊形，大小較一致；各項生化指標均在正常范圍；環(huán)氧合酶2 mRNA不表達。 2.8周末，模型組大鼠出現(xiàn)了明顯的脂質(zhì)代謝紊亂；血清轉(zhuǎn)氨酶水平較對照組明顯升高；肝組織出現(xiàn)了輕到中度脂肪變，且無炎細胞浸潤；肝臟環(huán)氧合酶2 mRNA的表達較其對照組顯著升高。用藥組大鼠血清和肝組織各項指標均明顯改善；肝脂變程度較模型組明顯減輕；肝組織環(huán)氧合酶2mRNA表達顯著降低(P

5、＜0．05)。 3.12周末，和對照組相比，模型組大鼠血脂和肝臟脂質(zhì)含量、轉(zhuǎn)氨酶水平明顯升高；HDL—C含量明顯降低；肝組織出現(xiàn)中到重度脂肪變，肝小葉內(nèi)炎細胞浸潤和散在的點狀壞死，炎癥活動度計分明顯高于對照組(P＜0．01)；肝組織環(huán)氧合酶2 mRNA表達顯著升高，且與前期相比差異顯著(P＜0．01)。用藥組大鼠血清和肝組織各項指標均明顯改善；肝組織環(huán)氧合酶2mRNA表達顯著降低(P＜0．01)；肝組織脂變程度及炎癥活動度明顯