降脂益生菌對非酒精性脂肪肝大鼠膽汁酸代謝的影響.pdf

1、背景和目的：
　　非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）包含了一些列肝臟病理學變化，從單純性肝細胞脂肪沉積到非酒精性脂肪性肝炎，甚至可以發(fā)展為肝硬化或者肝細胞癌。NAFLD特點是過多的中性脂質沉積在肝細胞中，導致脂質利用與脂質排出失衡。目前，NAFLD是世界上最常見的肝病，可影響到25％-30%人群，尤其是，在超重、肥胖及Ⅱ型糖尿病患者中，NAFLD非常普遍。而且，NA

2、FLD與代謝綜合征的特征密切相關，而表現在肝臟上的這些特征則可增加心臟代謝危險[1-3]。
　　盡管NAFLD發(fā)病的病理生理學機制很復雜，并且尚未完全清楚[4]，目前多數研究者認為長期高脂飲食（high fat diet,HFD）、腸道菌群紊亂紊亂參與代謝綜合征的發(fā)病。此外，一系列研究已經表明腸道菌群與腸-肝軸之間存在著雙向互動即微生物-腸-肝軸，應用益生菌干預則可以減輕肝臟脂肪浸潤。然而，在非酒精性脂肪肝中，腸道微生物如何影響腸

3、-肝軸發(fā)揮作用目前也尚未明確。
　　非酒精性脂肪肝主要通過限制能量攝入、運動以及藥物等方法治療，但效果均不理想。我們前期研究證實，給予高脂飲食大鼠降脂益生菌（DM9054+86066菌株）干預通過調節(jié)腸道菌群，可降低大鼠血脂水平，改善肝臟脂肪變性，減輕肝臟炎癥及肝細胞損傷，并且可以上調腸道FXR mRNA表達水平。這表明我們篩選的降脂益生菌可能通過調控膽汁酸代謝改善動物模型高脂血癥及脂肪肝，但其對膽汁酸代謝的具體影響及機制仍不清楚

4、。
　　因此，本研究通過高脂飲食建立NAFLD大鼠模型，研究NAFLD大鼠膽汁酸代謝變化，并探討降脂益生菌如何通過調節(jié)膽汁酸代謝改善大鼠非酒精性脂肪肝，為開拓NAFLD的新療法提供理論依據。
　　材料和方法：
　　SPF級雄性SD大鼠21只（體重180g-200g），適應性喂養(yǎng)7天后，隨機選取7只分別分組為對照組，模型組，降脂益生菌干預組。對照組給予正常飲食，模型組及干預組給予高脂飲食。對照組及模型組給予生理鹽水灌胃，

5、干預組給予2×1010cfu益生菌（DM9054及86066各1×1010cfu）灌胃。建模及干預時間均為20周，每周測體重及飲食量一次。實驗結束后處死大鼠，留取各組大鼠血清、肝臟、回腸組織及糞便。南京建成試劑盒檢測大鼠血清甘油三酯及膽固醇水平；ELISA檢測大鼠血清CK-18 M30水平。使用Real Time PCR評估了CYP7A1、FXR mRNA以及回腸FXR、ASBT、FGF15 mRNA表達水平。Western blot檢

6、驗肝臟CYP7A1、FXR及回腸ASBT蛋白表達水平。免疫組織化學法分析肝臟FXR及腸道FXR蛋白表達水平。
　　結果：
　　1.大鼠一般指標變化：與對照組相比，模型組體重明顯增加，血甘油三酯、膽固醇水平升高，血清CK18水平升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組相比，降脂益生菌干預后可使大鼠體重減輕，血清甘油三酯、膽固醇及CK18水平降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.病理變化：與對照組相

7、比，模型組肝臟HE染色及蘇丹染色可見明顯炎癥細胞及脂肪浸潤，益生菌干預后肝臟脂肪浸潤減輕；回腸HE染色可見模型組小腸絨毛損傷，而益生菌干預后可使腸絨毛損傷好轉。
　　3.大鼠肝臟CYP7A1表達水平：與對照組相比，模型組肝臟CYP7A1 mRNA表達量明顯降低(P<0.05)；與模型組相比，干預組CYP7A1 mRNA表達量明顯上升(P<0.05)；肝臟CYP7A1蛋白表達結果與基因表達水平一致。
　　4.大鼠肝臟FXR表達

8、水平：與對照組相比，模型組肝臟FXR mRNA表達水平明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，干預組肝臟FXR mRNA表達水平明顯降低。Western blot及免疫組化結果與基因表達水平一致。
　　5.大鼠腸道FXR-FGF15信號通路變化：與對照組相比，模型組腸道FXR，FGF15 mRNA水平降低(P<0.05)；與模型組相比，干預組腸道FXR，FGF15 mRNA明顯升高(P<0.05)。回腸FXR免疫組化結果與基因表達

9、水平一致。
　　6.大鼠腸道ASBT表達水平：與對照組相比，模型組小腸ASBT mRNA表達水平明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，干預組小腸ASBT mRNA表達水平明顯降低(P<0.05)。Western blot結果與基因表達水平一致。
　　結論：
　　1.長期高脂飲食可造成 SD大鼠肝臟脂肪浸潤及肝細胞損傷，降脂益生菌干預則可改善脂肪肝；
　　2.在非酒精性脂肪肝大鼠模型中，長期高脂飲食下調CYP7A