美他多辛對酒精性脂肪肝大鼠肝組織中CYP2E1表達影響的研究.pdf

1、目的：通過建立酒精性脂肪肝大鼠動物模型，探討美他多辛對大鼠預(yù)防酒精性脂肪肝的機理。研究美他多辛對大鼠肝組織CYP2El的基因表達的影響。方法清潔級雄性Wistar大鼠30只，體重200+10g，分籠飼養(yǎng)，每籠5只。在室溫及濕度穩(wěn)定條件下，按晝夜時程，全價顆粒飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后，隨機分為3組。①酒精性脂肪肝組（簡稱脂肪肝組），40％(v/v)乙醇，劑量8g/(kg·d)，每日分2次灌胃，間隔8-9 h，灌胃4w。自第5w開始，將乙

2、醇濃度增至50％(v/v)，灌胃至8w。②酒精性脂肪肝預(yù)防組（簡稱預(yù)防組），乙醇灌胃時間間隔及頻率同期脂肪肝組，乙醇灌胃同期灌服美他多辛300 mg/(kg.d)。③空白對照組（簡稱對照組）：按乙醇灌胃間隔及頻率給予等體積生理鹽水。各組大鼠于灌胃8w后，腹部備皮，行影像學(xué)檢查；影像學(xué)檢查后，將全部大鼠麻醉，打開腹腔，迅速取出肝臟，洗凈所帶血液，觀察肝組織大體形態(tài)，顏色；取肝舌葉經(jīng)4％多聚甲醛固定后石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織

3、病理學(xué)變化；采用免疫組化、RT-PCR測定肝組織中CYP2El的蛋白及基因表達，以檢測酒精對雄性酒精性肝病大鼠的CYP2El的表達的影響，以及美他多辛是否對雄性酒精性肝病大鼠CYP2El的表達有干預(yù)作用。
　　 結(jié)果大鼠酒精性脂肪肝模型建立成功，過程中，脂肪肝組有2只死亡，均為酒精誤吸入氣管所致；預(yù)防組有2只死亡，1只為酒精誤吸入氣管所致，1只為肺部感染死亡；對照組無大鼠死亡。
　　 肝臟影像學(xué)變化對照組10只大鼠肝臟B

4、超檢查示肝臟包膜光滑，回聲均質(zhì)，血管紋理清。脂肪肝組8只大鼠B超檢查示肝臟回聲稍密、稍強，血管紋理不清；預(yù)防組肝臟8只大鼠B超下示肝臟回聲稍密、稍強，血管紋理較B組顯示清晰。
　　 肝組織形態(tài)及病理學(xué)變化對照組大鼠肝臟為鮮紅色，邊緣銳利，表面光滑，切面無顆粒感；脂肪肝組、預(yù)防組肝臟形態(tài)變化相似，均有體積的增大，切面油膩。脂肪肝組肝臟顏色呈暗黃色，預(yù)防組肝臟顏色較脂肪肝組淺，但比對照組深。光鏡下觀察，①脂肪肝組：肝細胞腫脹、氣球樣

5、變，點狀肝細胞壞死，呈酒精小體，肝竇略顯狹窄，肝細胞脂肪變性以肝腺泡3區(qū)明顯，匯管區(qū)可見淋巴、單核細胞浸潤；②預(yù)防組：鏡下觀察，與脂肪肝組肝細胞相比腫脹程度減輕，氣球樣變少，酒精小體較脂肪肝組少，肝細胞脂肪變較脂肪肝組輕；③對照組：大鼠肝小葉完整，輪廓清晰，肝細胞呈多邊形，細胞圍繞中央靜脈呈放射狀，肝竇清晰可見，肝索排列整齊，肝小葉匯管區(qū)基本結(jié)構(gòu)清晰可見。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05）。免疫組化檢測CYP2E1蛋白表達①脂肪肝組：棕黃

6、色顆粒表達明顯增多，且分布呈一定規(guī)律性，多集中在肝腺泡3區(qū)，門靜脈周圍向l、2區(qū)擴展，與脂肪變分布一致；②預(yù)防組，肝組織CYP2El表達水平介于對照組與脂肪肝兩組CYP2El表達水平之間；③對照組：CYP2El表達僅見于中央靜脈周圍區(qū)，主要表達于肝腺泡3區(qū)，肝細胞膜及漿均可見其表達。應(yīng)用image proplus6.0免疫組化圖像分析系統(tǒng)對酒精性脂肪肝大鼠肝組織中CYP2El的表達進行灰度值分析，脂肪肝組，預(yù)防組較對照組，CYP2El表

7、達均明顯增多，（P<0.05）；脂肪肝組較預(yù)防組，CYP2E1表達增多，(P<0.05)；應(yīng)用捷達801凝膠圖像分析系統(tǒng)，對酒精性脂肪肝大鼠肝組織中的CYP2E1mRNA的表達進行灰度值分析，脂肪肝組，預(yù)防組較對照組，CYP2El m RNA的表達均明顯增多，（P<0.05）；脂肪肝組較預(yù)防組，CYP2Elm RNA的表達增多，(P<0.O5).(r=0.855，P<0.01).
　　 結(jié)論通過給大鼠連續(xù)灌服酒精導(dǎo)致大鼠肝組織脂

8、肪性病變，經(jīng)肝組織病理學(xué)變化及肝影像學(xué)檢測表明本實驗酒精性脂肪肝大鼠動物模型建立成功。酒精性脂肪肝的發(fā)生與CYP2E1的增高成正比，且CYP2El參與了酒精性脂肪肝的發(fā)生和發(fā)展。CYP2El參與了酒精性脂肪肝的發(fā)牛和發(fā)展，其表達的上調(diào)與酒精性脂肪肝的發(fā)生成正比；美他多辛可以通過有效的抑制CYP2El mRNA基因的表達的上調(diào)，降低CYP2El的表達水平，影響酒精性脂肪肝的發(fā)生和發(fā)展，從而有效的預(yù)防酒精性脂肪肝的發(fā)生，并對酒精性脂肪肝的發(fā)