CD97-siRNA轉(zhuǎn)染對胃癌細(xì)胞株MKN45生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文CD97siRNA轉(zhuǎn)染對胃癌細(xì)胞株MKN45生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制的初步研究姓名：龔道軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：普通外科學(xué)指導(dǎo)教師：陳力20090501浙江大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要重要作用。然而，CD97對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其內(nèi)在機(jī)制仍然有待于闡明。第一章CD97siRNA轉(zhuǎn)染對人胃癌細(xì)胞株MKN45增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的影響目的：設(shè)計(jì)合成有效的CD97siRNA，體外轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株，觀察C

2、D97表達(dá)變化及其對體內(nèi)、外胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的影響。方法：1采用人胃癌細(xì)胞株MKN45，針對CD97基因設(shè)計(jì)siRNA，采用化學(xué)法合成，篩選出最有效的CD97siRNA。2CD97siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞48小時后，用RTPCR檢測CD97基因在mRNA水平表達(dá)的變化，72小時后用Westernblot和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測CD97基因在蛋白水平表達(dá)的變化，并用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的變化，用細(xì)胞遷移

3、和侵襲試驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。315只裸鼠隨機(jī)分為3組，每組5只，分別接種轉(zhuǎn)染siRNACD97細(xì)胞(抑制組)，接種轉(zhuǎn)染陰性對照siRNACD97細(xì)胞(陰性對照組)，接種未轉(zhuǎn)染細(xì)胞(正常對照組)。接種4周后，觀察各組成瘤情況，比較成瘤率。結(jié)果：1CD97一siRNA轉(zhuǎn)染48小時后，RTPCR方法檢測結(jié)果表明CD97在mRNA水平表達(dá)下降7012％；72小時后，Westernblot方法檢測結(jié)果表明CD97在蛋白水平的表達(dá)下