大蒜葉枯病病原生物學(xué)及病菌毒素培養(yǎng)條件研究.pdf

1、葉枯病(Garlic tip blight)是大蒜生產(chǎn)中常發(fā)的一種主要病害，近年來(lái)在大蒜生產(chǎn)中呈上升趨勢(shì)。本文對(duì)大蒜葉枯病病原菌的生物學(xué)特性和病菌毒素的活性與培養(yǎng)條件的關(guān)系進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究，旨在篩選出菌絲、孢子最佳培養(yǎng)條件及病菌產(chǎn)毒最佳條件，為以后利用大蒜葉枯病病原菌粗毒素，篩選具穩(wěn)定遺傳性的大蒜抗葉枯病細(xì)胞變異系奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1.病原菌采集、分離及鑒定在陜西周至縣和楊凌區(qū)生產(chǎn)田間大蒜葉片上采集典型病癥的病原

2、菌，室內(nèi)分離，并經(jīng)致病性鑒定，對(duì)回接引起的病癥病狀和病原菌形態(tài)特征進(jìn)行了描述。確定該病為匐柄霉屬Stemphylium vesicarium(Wallr)Simmons引起的大蒜葉枯病。 2大蒜葉枯病原菌的生物學(xué)特性對(duì)大蒜葉枯病病菌菌絲和產(chǎn)孢的培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度，光照，培養(yǎng)基pH值)進(jìn)行了較系統(tǒng)的試驗(yàn)研究。分別在培養(yǎng)2、4、6、8 d后觀察菌絲生長(zhǎng)，于10 d測(cè)定產(chǎn)孢量，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。結(jié)果表明：在pH為7的

3、PDA、PSA、PCA和CSA4種病菌培養(yǎng)基中，菌絲生長(zhǎng)速度有一定差異。以PSA培養(yǎng)基為最適宜培養(yǎng)基，其次為PDA培養(yǎng)基。病菌在pH 7的PSA培養(yǎng)基上分別置于15、18、20、22、24、26、28、30、35和40℃的溫度下培養(yǎng)表明，病菌菌絲生長(zhǎng)溫度范圍為18～30℃，生長(zhǎng)適宜溫度為20～28℃，以28℃為最適。產(chǎn)孢的適宜溫度范圍為20～30℃，以26℃產(chǎn)孢量最多。病菌在pH7的PSA培養(yǎng)基中分別進(jìn)行24 h光照(簡(jiǎn)稱24 L)、1

4、2 h光照/12 h黑暗(簡(jiǎn)稱12 L/12 D)和24h黑暗(簡(jiǎn)稱24 D)3個(gè)處理，結(jié)果表明光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響不明顯，但光照較利于產(chǎn)孢。在培養(yǎng)基pH分別為4～12的PSA培養(yǎng)基處理中，病原菌在pH 5～12間均可生長(zhǎng)，以pH 8下菌絲平均生長(zhǎng)速率最快。病菌的產(chǎn)孢適宜pH值為7～9，以pH 8下孢子最多。 3.大蒜葉枯病病菌產(chǎn)生毒素的培養(yǎng)條件及其毒性對(duì)大蒜葉枯病病菌菌株的培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度，光照，振蕩，培養(yǎng)基pH值，培

5、養(yǎng)時(shí)間)進(jìn)行了較系統(tǒng)的試驗(yàn)研究。分別于培養(yǎng)4，6，8，10，12，14，16，18，20和122 d取樣，得到大蒜葉枯病病菌粗毒素，并利用大蔥種子發(fā)芽法生物檢測(cè)病菌培養(yǎng)毒素的毒性。結(jié)果表明：在pH為7的PS、I-Fries、Czapek-Dox和I-Richard 4種病菌培養(yǎng)基中，從Czapek-Dox培養(yǎng)基中得到的病菌粗毒素對(duì)大蔥種子發(fā)芽的抑制作用最強(qiáng)，在培養(yǎng)20 d時(shí)，大蔥種子發(fā)芽率僅為10.5％；將接菌的pH 7的Czapek-

6、Dox培養(yǎng)液分別置于18，20，22，24，26，28和130℃溫度條件下培養(yǎng)，在24℃病菌產(chǎn)生粗毒素的能力最強(qiáng)，在培養(yǎng)20 d時(shí)，大蔥種子發(fā)芽率降至最小值10.0％；將接菌的pH 7的Czapek-Dox培養(yǎng)液分別置于連續(xù)黑暗靜置、連續(xù)光照靜置、連續(xù)黑暗振蕩、連續(xù)光照振蕩、每天12 h光照12 h黑暗振蕩、每天12 h光照12 h黑暗靜置6個(gè)處理中，以連續(xù)黑暗振蕩培養(yǎng)條件下病菌產(chǎn)生的毒素對(duì)大蔥種子發(fā)芽率的影響最大，在培養(yǎng)20 d時(shí)，大