彗星實驗檢測大鼠衰老腦細胞和PC12細胞DNA損傷與修復.pdf

1、同濟醫(yī)科大學碩士學位論文彗星實驗檢測大鼠衰老腦細胞和PC12細胞DNA損傷與修復姓名：韓宗超申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：張?zhí)K明;方思羽19990501彗星實驗} 盤洲太融衰= 老腦細胞和P C I 2 細胞D N A 損傷與修復 同濟醫(yī)科丈學碩士學位論文第一部分彗星實驗檢溯氧化介導的大鼠衰老神經(jīng)細胞D 姒損傷與修復【摘要】目的為了確定腦細胞D N A 損傷敏感性和D N A 修復能力與衰老過程的關系，本研究運用鹼性單細胞電

2、泳法( 又稱彗星實驗) 觀鋇4 了過氧化氫誘導的衰老神經(jīng)細胞D N A 損傷與修復的情況。方法經(jīng)不同濃度H 。O 。處理的3 月鼠( 1 0 只) ．8 月鼠( 8 只) 和2 6 月鼠( 5 只) 的腦皮質、海馬和基底節(jié)經(jīng)分離的腦細胞，未經(jīng)H 2 0 ，處理的細胞作為對照組。細胞與低熔點瓊脂糖混合，制片，裂解，解旋，經(jīng)電泳和熒光染色后，有氧化損傷的單鏈D N A 斷裂細胞在熒光顯微鏡觀察下呈彗星樣改變。光學記錄單視野并作彗星圖象分析。

3、運用拖尾細胞頻率等指標確定受損單鏈D N A 斷裂的細胞及其損傷程度分級。結果衰老腦細胞D N A 較正常腦細胞更易受到氧化損傷。在相同干預條件下，皮質細胞較海馬、基底節(jié)區(qū)細胞更易受損傷。給予O ．5 - 4 h 孵育后，表明腦細胞最大修復時間僅為1 h ，且衰老腦細胞較正常腦細胞的D N A 修復能力差。結論彗星實驗是一種非常敏感的用來檢測D N A 損傷與修復的方法。該實驗提供了一個很好的檢測衰老腦細胞D N A 氧化損傷與修復的細

4、胞實驗模型?！娟P鍵詞】衰老神經(jīng)細胞D N A 損傷D N A 修復P e r o x i d e - m e d i a t e dD N A d ．1 M l 也．g e a n dr e p a i ri nt h eb r a i nc e l l si nt h ea g i n gr a t sd e t e c t e db yt h ea l k a l i n es i n g l e c e l lg e l e l