LASS2在肝癌生長和轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、LASS2(homo sapiens longevity assurance homologue2)是本室從人肝cDNA文庫中篩選到的一個與酵母(Saccharomyces cerevisiae)長壽保障基因LAG1(yeastlongevity assurance gene1)高度同源的人類新基因。LASS2基因定位于染色體lq11，屬于LASS蛋白家族中的一員。
　　在LASS2基因功能的前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)LASS2可

2、以抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721的生長。為了驗證這一結(jié)果，我們將本室構(gòu)建保存的pCMV-HA2-LASS2質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞HCCLM3，未轉(zhuǎn)質(zhì)粒的HCCLM3細(xì)胞作為對照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)外源性LASS2的過表達(dá)對HCCLM3細(xì)胞生長有抑制作用。為了深入研究LASS2基因調(diào)控細(xì)胞生長的機(jī)理，我們利用流式細(xì)胞儀和Western blotting方法分析了細(xì)胞的凋亡情況。研究發(fā)現(xiàn)，LASS2的過表達(dá)可以激活細(xì)胞的線粒體凋亡通路，介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)

3、生凋亡。提示LASS2可能通過介導(dǎo)細(xì)胞凋亡來發(fā)揮其抑制細(xì)胞生長的作用。
　　前期實驗還發(fā)現(xiàn)，LASS2在高轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞中低表達(dá)，而在低轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)；并且，LASS2能與V-ATPase質(zhì)子泵的c亞基ATP6L相互結(jié)合。V-ATPase質(zhì)子泵是真核細(xì)胞膜上存在的一種與H+主動轉(zhuǎn)運有關(guān)的跨膜蛋白，其c亞基ATP6L參與H+跨膜通道的形成。目前有很多文獻(xiàn)報導(dǎo)V-ATPase質(zhì)子泵，尤其是c亞基ATP6L與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。以上

4、提示LASS2可能參與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。為了研究LASS2在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，我們利用RNA干擾技術(shù)，下調(diào)低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞MHCC97-L中LASS2基因的表達(dá)，通過檢測V-ATPase質(zhì)子泵的泌氫功能，對H+敏感的基質(zhì)蛋白水解酶MMP-2的含量和活性，以及體外侵襲實驗，探討LASS2基因通過調(diào)控質(zhì)子泵的泌氫功能來參與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制。結(jié)果顯示，當(dāng)LASS2基因的表達(dá)被抑制后，質(zhì)子泵的泌氫功能增加，細(xì)胞外H+濃度升高，細(xì)胞外

5、MMP-2的活性形式明顯增加，MHCC97-L細(xì)胞體外侵襲能力顯著增強(qiáng)。提示LASS2基因可能通過調(diào)控V-ATPase質(zhì)子泵參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。
　　綜上所述，本研究中我們探討了LASS2參與肝癌細(xì)胞體外侵襲的機(jī)制，加深了對LASS2參與肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的了解。然而，LASS2調(diào)控細(xì)胞生長和凋亡的具體途徑還不清楚。LASS2具有HOX、TLC兩個功能域，它可以通過誘導(dǎo)神經(jīng)酰胺合成酶活性，增高細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量，導(dǎo)致細(xì)胞通過線粒體途徑