鋅指蛋白439在肝細胞性肝癌生長及轉移中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　本課題旨在探究鋅指蛋白439(zinc finger protein439，ZNF439)在肝細胞性肝癌及其癌旁組織中的表達情況，初步探究其在肝細胞性肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。在人肝細胞性肝癌細胞株中過表達ZNF439，通過相關實驗探究ZNF439對肝細胞性肝癌生長增殖及遷徙轉移能力的影響。
　　方法：
　　運用免疫組織化學方法，檢測21例臨床病理確診的肝細胞性肝癌及其癌旁相對正常肝組織芯片標本，觀察ZNF

2、439在肝細胞性肝癌及其癌旁相對正常肝組織中的表達情況，同時比較ZNF439在二者中的表達差異。應用G418抗性篩選，在人肝癌細胞株Hep-3b及LM3中構建ZNF439過表達穩(wěn)轉細胞株。通過MTS法細胞生長增殖實驗，檢測ZNF439過表達對肝細胞性肝癌細胞生長增殖的影響;通過transwell小室細胞遷徙實驗、細胞骨架熒光染色實驗以及體外血管生成實驗，檢測ZNF439過表達對肝細胞性肝癌細胞遷徙轉移能力的影響。
　　結果：

3、>　　在免疫組化實驗中，ZNF439只在肝細胞核中表達，細胞漿中不表達。肝細胞性肝癌組織細胞核中，ZNF439主要呈陰性及弱陽性表達，分別占總病例數的66.7％和28.6％，其次為中等陽性表達，占總病例數的4.7％;而在癌旁肝臟組織細胞核中，ZNF439絕大多數呈現強陽性及中等陽性表達，分別占總病例數的38.1％和28.6％，其次為弱陽性表達，占總病例數的33.3％。通過卡方檢驗，兩組之間質檢存在顯著性差異(P＜0.0001)。應用G4

4、18抗性篩選，成功在人肝細胞肝癌細胞株Hep-3b及LM3中構建了ZNF439過表達穩(wěn)轉細胞株。并通過半定量RT-PCR和蛋白印跡免疫(Western Blot)方法進行了驗證。MTS法細胞生長增殖實驗表明，ZNF439過表達不影響Hep-3b及LM3人肝癌細胞株的生長增殖能力。通過transwell小室細胞遷移實驗表明，ZNF439過表達后肝癌細胞Hep-3b及LM3的遷徙轉移能力受到明顯抑制。細胞骨架熒光染色實驗顯示，ZNF439基

5、因過表達后Hep-3b及LM3細胞的環(huán)形骨架增多，極性減少，形態(tài)改變被抑制。體外血管生成實驗表明，在LM3細胞中，ZNF439基因過表達后其微血管生成能力受抑制。然而在ZNF439過表達和空載的Hep-3b細胞株中，均未觀察到微血管形態(tài)生成現象。
　　結論：
　　ZNF439在肝細胞性肝癌組織及其癌旁肝臟組織中存在差異表達，提示ZNF439可能參與到肝細胞性肝癌的發(fā)生過程中。ZNF439不影響肝細胞性肝癌的生長增殖，但ZNF