胰島素-PI3K-Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生關(guān)系的研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病機(jī)制至今不清，全世界范圍內(nèi)逐年增長的發(fā)病率使得關(guān)于其病因及發(fā)病機(jī)制的研究顯得尤為重要。 肥胖、高血壓、糖尿病被稱為內(nèi)膜癌三聯(lián)征，多囊卵巢綜合征患者則是年輕內(nèi)膜癌的高危人群，這些內(nèi)膜癌高危因素共同的病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗及繼發(fā)的高胰島素血癥。作為一種多功能激素，胰島素除了參與物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)，還可通過其下游信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控某些細(xì)胞的生長與分化，磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/Akt 和R

2、as/MAPK 是兩條主要的通路。研究表明胰島素及其下游信號(hào)分子的過度表達(dá)或異常激活可能與某些腫瘤的發(fā)生有關(guān)，而關(guān)于胰島素信號(hào)通路與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)性的研究鮮見報(bào)道。本研究將利用人子宮內(nèi)膜癌組織以及子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系探討胰島素/PI3K/Akt 信號(hào)傳導(dǎo)通路在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 第一部分 胰島素受體的表達(dá)、活化與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究 目的：探討胰島素受體表達(dá)水平、活化程度與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生之間的關(guān)系以及胰島素受體活

3、化程度與循環(huán)胰島素水平的相關(guān)性。 方法：63例子宮內(nèi)膜癌、21例非典型增生及22例正常內(nèi)膜患者均來自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院婦科。收集臨床資料、測量身體指標(biāo)、檢測空腹血清C肽及胰島素水平。RT-PCR、Western blot 檢測內(nèi)膜胰島素受體mRNA、蛋白表達(dá)水平，免疫共沉淀/Western blot 檢測胰島素受體β亞單位酪氨酸磷酸化程度。 結(jié)果：子宮內(nèi)膜癌組血清 C 肽和胰島素水平顯著高于正常內(nèi)膜組。無論正?；虿±?，子

4、宮內(nèi)膜普遍存在胰島素受體 mRNA、蛋白表達(dá)，其活化水平與空腹血清 C 肽及胰島素水平呈顯著正相關(guān)性(r=0.496，0.334)。子宮內(nèi)膜癌胰島素受體表達(dá)水平及活化程度均高于非典性增生及正常內(nèi)膜組。非典性增生及正常內(nèi)膜的胰島素受體表達(dá)量無顯著性差異，但非典性增生組胰島素受體活化水平高于正常對(duì)照。子宮內(nèi)膜樣腺癌的胰島素受體表達(dá)水平及活化程度均高于非內(nèi)膜樣腺癌。FIGOⅢ期、細(xì)胞分化不良的內(nèi)膜癌患者其內(nèi)膜胰島素受體的表達(dá)水平及活化程度均顯

5、著增高；盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者胰島素受體的活化水平也顯著增高。 結(jié)論：子宮內(nèi)膜細(xì)胞普遍存在胰島素受體的表達(dá)，此為胰島素信號(hào)傳導(dǎo)的物質(zhì)基礎(chǔ)。子宮內(nèi)膜胰島素受體的活化程度與循環(huán)胰島素水平顯著正相關(guān)。子宮內(nèi)膜癌存在胰島素受體的過度表達(dá)及活化，并與不良臨床病理特征有關(guān)。 第二部分 胰島素受體底物-1的表達(dá)、活化與內(nèi)膜癌關(guān)系的研究 目的：探討胰島素受體底物-1(insulin receptor substrate-1，IRs-1

6、)的表達(dá)、活化與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生之間的關(guān)系以及IRS-1、胰島素受體二者功能狀態(tài)的相關(guān)性。 方法：63例子宮內(nèi)膜癌、21例非典型增生及22例正常內(nèi)膜患者均來自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院婦科。RT-PCR、Western blot檢測內(nèi)膜組織IRS-1 mRNA及蛋白表達(dá)水平，免疫共沉淀/Western blot檢測IRS-1 蛋白酪氨酸磷酸化程度。 結(jié)果：無論正常或病理，子宮內(nèi)膜普遍存在胰島素受體底物-1 mRNA 及蛋白的表達(dá)。

7、子宮內(nèi)膜IRS-1 活化水平與空腹血清C肽及胰島素水平呈顯著正相關(guān)性(r=0.491，0.259)。子宮內(nèi)膜胰島素受體、受體底物二者的活化呈顯著正相關(guān)性(r=0.691)。子宮內(nèi)膜癌、非典性增生及正常內(nèi)膜三組的胰島素受體底物-1 的mRNA、蛋白表達(dá)水平均無顯著性差異。子宮內(nèi)膜癌 IRS-1 活化程度高于非典性增生及正常內(nèi)膜組，非典性增生組 IRS-1 酪氨酸磷酸化水平高于正常內(nèi)膜。子宮內(nèi)膜樣腺癌的胰島素受體底物-1 的活化水平高于非內(nèi)

8、膜樣腺癌。子宮內(nèi)膜癌胰島素受體底物-1 的過度活化與細(xì)胞分化不良、深肌層浸潤、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及手術(shù)一病理分期的增高有關(guān)。 結(jié)論：子宮內(nèi)膜細(xì)胞普遍存在胰島素受體底物-1 的表達(dá)，其活化程度與內(nèi)膜胰島素受體活化水平以及循環(huán)胰島素水平呈顯著正相關(guān)，提示胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，胰島素在子宮內(nèi)膜細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)在其受體底物水平無顯著缺陷。子宮內(nèi)膜癌存在胰島素受體底物-1 的過度活化，并與不良臨床病理特征有關(guān)。 第三部分 P13K/Akt

9、的表達(dá)、活化與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究 目的：探討磷脂酰肌醇 3-激酶(P13K)/Akt 的表達(dá)、活化與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的關(guān)系及其與胰島素受體、受體底物活化的相關(guān)性。 方法：63例子宮內(nèi)膜癌、21例非典型增生及22例正常內(nèi)膜患者均來自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院婦科。RT-PCR 檢測內(nèi)膜組織p85 mRNA 表達(dá)：Western blot 檢測Akt 蛋白表達(dá)水平及活化程度。 結(jié)果：無論正?；虿±恚訉m內(nèi)膜普遍存在 p85、

10、Akt 表達(dá)。子宮內(nèi)膜 Akt活化水平與空腹血清C肽、胰島素水平呈顯著正相關(guān)性(r=0.514，0.490)。子宮內(nèi)膜Akt活化程度與胰島素受體、受體底物的活化水平呈顯著正相關(guān)性(r=0.720，0.681)。不同組別p85mRNA、Akt蛋白表達(dá)水平無顯著性差異。子宮內(nèi)膜癌Akt活化程度顯著高于非典型增生及正常內(nèi)膜組，非典性增生Akt活化水平也高于正常內(nèi)膜組。高手術(shù)．病理分期、細(xì)胞分化不良、深肌層浸潤、腹腔細(xì)胞學(xué)陽性、漿膜受累以及盆腔

11、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的內(nèi)膜癌患者Akt活化程度顯著增高。 結(jié)論：子宮內(nèi)膜細(xì)胞存在胰島素/P13K/Akt通路信號(hào)下傳的物質(zhì)基礎(chǔ)。胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下子宮內(nèi)膜的胰島素/P13K/Akt通路無顯著的信號(hào)傳導(dǎo)缺陷。子宮內(nèi)膜細(xì)胞癌存在Akt的過度活化，并與不良臨床病理特征相關(guān)。 第四部分 P13K/Akt 信號(hào)通路在胰島素調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、凋亡中的作用 目的：探討PI3K/Akt通路在胰島素促內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、抑制凋亡中的作用。

12、 方法：血清饑餓的子宮內(nèi)膜癌 Ishikawa 3-H-12細(xì)胞被分為不同處理組：空白對(duì)照組：10<'-6>mol/L 胰島素處理組；不同濃度(0.1,1,10,50μmol/L)LY294002預(yù)處理后再以胰島素刺激組。Western blot檢測各組Akt活化情況，MTT法檢測細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測凋亡。 結(jié)果：胰島素可誘導(dǎo)內(nèi)膜癌細(xì)胞的Akt磷酸化活化，而LY294002則以濃度依賴性方式拮抗胰島素對(duì)Akt的活化，證

13、實(shí)內(nèi)膜癌細(xì)胞存在胰島素/PI3K/Akt通路。MTT 實(shí)驗(yàn)顯示：胰島素對(duì)內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖具有顯著的促進(jìn)作用，而 LY294002以濃度依賴性方式抑制胰島素的促增殖作用。流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，胰島素顯著抑制內(nèi)膜癌細(xì)胞的凋亡，LY294002 以濃度依賴性方式拮抗胰島素的抗凋亡作用。 結(jié)論：胰島素可促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，PI3K/Akt通路均參與其中。 綜上所述，子宮內(nèi)膜細(xì)胞過度表達(dá)胰島素受體，并且內(nèi)膜細(xì)胞胰島