PI3K-Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑與甲狀腺結(jié)節(jié)關(guān)系的研究.pdf

1、目的:國外研究顯示在甲狀腺結(jié)節(jié)性病變中可發(fā)現(xiàn)P13K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常激活。本實(shí)驗(yàn)旨在通過對(duì)此信號(hào)傳導(dǎo)通路中相關(guān)分子表達(dá)情況的研究,進(jìn)一步明確甲狀腺結(jié)節(jié)的病因、發(fā)病機(jī)制,進(jìn)而探索甲狀腺結(jié)節(jié)性病變的分子生物學(xué)防治策略。
　　 方法:研究對(duì)象分為甲狀腺結(jié)節(jié)病變組和正常對(duì)照組,甲狀腺結(jié)節(jié)病變組為2008年12月-2009年8月期間在濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院乳甲外科行手術(shù)治療的甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡型腺瘤以及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者中各

2、隨機(jī)選擇30例。正常甲狀腺組織取自甲狀腺濾泡型腺瘤旁組織(30例)。各組均未經(jīng)過化療、放療及內(nèi)分泌治療。記錄所有研究對(duì)象的姓名、性別、年齡等基本病例資料,統(tǒng)計(jì)甲狀腺結(jié)節(jié)組中甲狀腺乳頭狀癌亞組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及對(duì)甲狀腺包膜的浸潤程度。每例標(biāo)本收集100mg左右的新鮮組織各兩塊(癌取癌腫塊,腺瘤取腺瘤組織,結(jié)甲選取結(jié)節(jié)腫物),取材后10分鐘內(nèi)迅速保存于液氮中,后轉(zhuǎn)移保存到.80℃冰箱備用,同時(shí)收集以上標(biāo)本的存檔蠟塊。用RT-PCR方法測(cè)定上

3、述四種組織中P13K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑中P13KmRNA、AktmRNA的表達(dá)；應(yīng)用免疫組化法和Western-blot法測(cè)定甲狀腺乳頭樣癌、甲狀腺濾泡型腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺組織中P13K、Akt、p-Akt蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:①一般資料結(jié)果顯示,正常對(duì)照組年齡為37.474±6.79歲,結(jié)甲組40±8.51歲,乳頭狀甲狀腺癌37.13±6.36歲,各組間年齡、性別比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。②RT-

4、PCR結(jié)果顯示,甲狀腺結(jié)節(jié)中P13KmRNA和AktmRNA的含量較正常組織明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③免疫組化及WesternBlot結(jié)果顯示,甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡型腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫P13K、Akt、pAkt的蛋白的表達(dá)較正常甲狀腺組織明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),甲狀腺結(jié)節(jié)組中尤以甲狀腺乳頭狀癌升高為著,與甲狀腺濾泡型腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫亞組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),而甲狀腺濾泡

5、型腺瘤和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫之間無顯著性差異(P>0.05)。④相關(guān)分析顯示,在研究的甲狀腺組織中,蛋白P13K和Akt呈正相關(guān)(r=0.992,P<0.001)；P13K和pAkt呈正相關(guān)(r=0.974,P<0.001)；Akt和pAk-t呈正相關(guān)(r=0.976,P<0.001):P13KmRNA和AktmRNA呈正相關(guān)(r=0.978,P<0.001)。在甲狀腺乳頭狀癌中,P13K、Akt、pAkt三種蛋白的含量與病人年齡、性別無關(guān)(

6、P>0.05),而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和對(duì)包膜的浸潤程度有關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論:①P13KmRNA、AktmRNA的表達(dá)及P13K、Akt、pAkt蛋白的含量在乳頭狀癌、腺瘤和結(jié)甲中比正常甲狀腺中明顯升高,說明在這些甲狀腺結(jié)節(jié)性病變中存在P13K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常激活。②P13KmRNA、AktmRNA及P13K、Akt、pAkt蛋白在乳頭狀癌中升高最為顯著,說明在甲狀腺乳頭狀癌等惡性疾病中此通路激活水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于結(jié)甲