β-分泌酶活性及其二聚化的動態(tài)光學(xué)成像研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文β分泌酶活性及其二聚化的動態(tài)光學(xué)成像研究姓名：陸錦玲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：曾紹群駱清銘20070830II華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文分泌途徑，展示在細(xì)胞膜上，并顯現(xiàn)出很高的FRET效率。當(dāng)共轉(zhuǎn)染BACE到HeLa細(xì)胞內(nèi)時，dYβC的FRET效率明顯降低，而對照探針dYcC的FRET效率始終保持不變。此結(jié)果表明dYβC可在活細(xì)胞中被BACE有效酶切，可用于動態(tài)檢測活細(xì)胞內(nèi)的BACE活性，為BA

2、CE抑制劑的開發(fā)提供了一個活細(xì)胞篩選的平臺。此外，利用該探針分析了BACE在分泌途徑中具備酶活性的起始位點(diǎn)，證實(shí)BACE早在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中就具有酶活性，能夠?qū)ζ涞孜镞M(jìn)行酶切。3）為了研究BACE在活細(xì)胞中的存在形式，構(gòu)建了CFP和YFP標(biāo)記的全長BACE（BACEFL）和BACE活性部分(BACENT)。共聚焦熒光成像和受體漂白FRET實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BACEFL能夠定位到高爾基體、質(zhì)膜、內(nèi)涵體等細(xì)胞器中，而BACENT則被滯留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)里；BA