TNF-α對(duì)人滑膜細(xì)胞RANKL、OPG mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)是在破骨細(xì)胞分化、激活和凋亡過(guò)程中的一個(gè)重要信號(hào)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。這一系統(tǒng)不僅參與調(diào)節(jié)生理性骨重建，也與病理狀態(tài)下多種骨病的發(fā)生密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)選用滑膜作為研究對(duì)象。TNF-α是目前發(fā)現(xiàn)的一種強(qiáng)有力的骨吸收誘導(dǎo)劑。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α可調(diào)節(jié)RANKL和OPG 的表達(dá)。在一些炎性關(guān)節(jié)疾病和發(fā)生人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)的周圍組織中，TNF-α的水平是明顯升高的。盡管對(duì)骨溶解的原因已有許多研究，但對(duì)其機(jī)制一直不十分明確

2、。因而，探討TNF-α對(duì)人關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞中RANKL、OPG表達(dá)的影響，對(duì)于在細(xì)胞外分子信號(hào)傳遞水平進(jìn)一步闡明關(guān)節(jié)內(nèi)骨質(zhì)破壞疾病和人工關(guān)節(jié)無(wú)菌松動(dòng)的機(jī)理，并初步探索其預(yù)防及治療的藥物作用靶點(diǎn)有著重要的意義。
　　 方法：采用組織塊原代培養(yǎng)法分離人膝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)形態(tài)學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)情況。半定量RT-PCR方法檢測(cè)不同濃度TNF-α作用不同時(shí)間后滑膜細(xì)胞RANKL 和OPGmRNA水平表達(dá)的變化。<

3、br>　　 結(jié)果：組織塊法成功的培養(yǎng)出了人滑膜細(xì)胞，其中抗CD68 陽(yáng)性細(xì)胞占1％左右，符合巨噬細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞的特征；抗Vimentin 陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)99％以上，符合成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞的特征。TNF-α能刺激人滑膜細(xì)胞RANKL 和OPG mRNA的表達(dá)。同時(shí)，TNF-α濃度在10ng/ml 時(shí)RANKL/OPG 比值較對(duì)照組升高（P<0.01），并且TNF-α作用12h和24h時(shí)，RANKL/OPG比值均明顯高于對(duì)照組（P<0.01

4、）。
　　 結(jié)論：滑膜細(xì)胞RANKL 和OPG在mRNA水平隨著TNF-α濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而表達(dá)增多，但是在一定濃度的TNF-α作用一定時(shí)間后RANKL增加的幅度比OPG大，所以RANKL/OPG 的比值是升高的。故TNF-α在一定濃度和時(shí)間能夠通過(guò)上調(diào)RANKL/OPG濃度比，影響RANKL/RANK/OPG信號(hào)系統(tǒng)的平衡，從而可能參與影響病變關(guān)節(jié)周圍骨破壞。這或許可以為伴隨骨質(zhì)破壞的炎性關(guān)節(jié)疾病和人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)