5-HT6受體介導cAMP-PKA信號通路改善癲癇大鼠合并認知損害學習記憶及機制探討.pdf

1、【目的】觀察PKA/cAMP信號通路分子的變化,探討SB-271046改善氯化鋰-匹羅卡品致癲大鼠學習記憶的可能機制。
　　【方法】
　　1、實驗動物分組:清潔級成年雄性SD大鼠分成兩組:Vehicle(n=6);模型組(n=18),選造模成功后按隨機法分為三組:PILO組(n=6),10ugSB-271046組(n=6),20ugSB-271046組(n=6),另設Vehicle組(n=6)。
　　2、癲癇大鼠模型的

2、建立:腹腔注射LiCl127mg/kg,16-18h后腹腔注射PILO30mg/kg,然后30min內(nèi)連續(xù)觀察大鼠是否有癇性發(fā)作,按Racine分級,發(fā)作級數(shù)達到Ⅳ級及Ⅳ級以上持續(xù)時間>30min則判定為癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status Epilepticus,SE),即癲癇造模成功,納入實驗,未出現(xiàn)SE和死亡者則剔除。
　　3、側(cè)腦室給藥:造模成功兩周后,在腦立體定位儀幫助下,根據(jù)Watson《大鼠腦立體定位圖譜》,用微量進樣針給與大

3、鼠側(cè)腦室注射N-[4-Methoxy-3-(4-methyl-1-piperazinyl)-phenyl]-5-chloro-3-methylbenzo-thiophen e-2-yl-sulphonamide monohydrochloride(SB-271047),10ugSB-271046藥物組(10ug-SB組)劑量為10ug,4ul;20ugSB-271046藥物組(20ug-SB組)即側(cè)腦室注射SB-271046劑量為20u

4、g,4ul。PILO組給予側(cè)腦室注射羥丙基-β-環(huán)糊精(Hydroxypropyl-β-cyclodextrine,HP-β-CD),4ul,給予對照。
　　4、留取標本,檢測cAMP/PKA信號通路上的信號分子:AC、PKA、CREB、pCREB、BDNF的含量:側(cè)腦室給藥4h、8h后,灌注取腦,取海馬、皮質(zhì)、紋狀體不同部位。ELISA方法檢測各部位腺苷酸環(huán)化酶(Adenylate cyclase,AC)、蛋白激酶A(Prote

5、in kinase A,PKA)含量。western blot方法定量檢測皮質(zhì)、海馬、紋狀體轉(zhuǎn)錄因子環(huán)磷酸腺苷反應單元結(jié)合蛋白(cAMP responsive elemt birdingprotein,CREB)、磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應單元結(jié)合蛋白pCREB,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurophic factor)BDNF含量,real-time PCR方法檢測BDNF表達情況。
　　【結(jié)果】
　　1

6、、ELISA方法檢測AC和PKA結(jié)果顯示:與正常組相比,側(cè)腦室給藥4h和8h后,模型組、10ug組和20ug組大鼠海馬、皮質(zhì)、紋狀體AC和PKA的表達明顯升高(p<0.05或p<0.01)。
　　2、Western blot方法檢測pCREB、BDNF結(jié)果顯示:與正常組、模型組相比,側(cè)腦室給藥4h和8h后,10ug和20ug組大鼠海馬、皮質(zhì)、紋狀體pCREB明顯升高(p<0.05或p<0.01);與正常組相比,模型組、10ug組和

7、20ug組大鼠海馬、皮質(zhì)、紋狀體BDNF小亞基、大亞基明顯升高(p<0.05或p<0.01);模型組、10ug組和20ug組三組有依次降低的趨勢(p<0.05或p<0.01)。
　　3、Real-time-PCR方法檢測BDNFmRNA結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、10ug組和20ug組大鼠海馬、紋狀體BDNFmRNA表達明顯升高(p<0.05或p<0.01);模型組、10ug組和20ug組三組有依次降低的趨勢(p<0.05或p