甲型H1N1流感病毒單克隆抗體的制備及功能探索.pdf

1、目的：
　　 獲得分泌特異性抗H1N1亞型(A/California/04/2009)豬流感病毒單克隆抗體(mAb)的雜交瘤細(xì)胞并對(duì)其分泌抗體的功能進(jìn)行探索。
　　 方法：
　　 以表達(dá)血凝素蛋白H1(A/California/04/2009)的DNA疫苗為免疫原，免疫6～8周齡雌性BALB/c小鼠，取其脾細(xì)胞與NS1骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，通過(guò)間接ELISA方法篩選分泌抗H1N1亞型(A/California/

2、04/2009)抗體的雜交瘤細(xì)胞，再通過(guò)亞克隆篩選單一、穩(wěn)定分泌其抗體的細(xì)胞株。
　　 結(jié)果：
　　 獲得能穩(wěn)定分泌抗流感病毒血凝素H1亞型的單克隆抗體雜交瘤4株，分別命名為41H2，68E5，41E7和26D11。其中68E5，41E7和26D11為IgG1(K)；41H2為IgG2a(K)。運(yùn)用lenti—pseudovirus方法測(cè)試顯示26D11可識(shí)別結(jié)構(gòu)性位點(diǎn)，具有H1N1(A/California/04/20

3、09)專一性較強(qiáng)的中和能力，是中和性抗體。Westernblotting檢測(cè)顯示41H2和41E7為陽(yáng)性，識(shí)別線性位點(diǎn)。特異性實(shí)驗(yàn)表明26D11、41H2和41E7只與H1(A/California/04/2009)型流感病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，而不與其它15個(gè)HA亞型的流感病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，顯示出良好的特異性。
　　 結(jié)論：
　　 用單克隆抗體雜交瘤技術(shù)成功制備了甲型H1N1流感病毒的單克隆抗體，結(jié)合相關(guān)多克隆抗體，我們還