他莫昔芬對(duì)膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞輻射敏感性的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:本課題主要通過(guò)研究他莫昔芬聯(lián)合60 Coγ線(xiàn)輻照對(duì)SHG44.細(xì)胞DNA損傷及修復(fù)的影響；他莫昔芬聯(lián)合輻照對(duì)SHG44細(xì)胞Caspase9活性的影響；他莫昔芬聯(lián)合60 Coγ線(xiàn)輻照對(duì)SHG44細(xì)胞PK Cα、Cyclin D1及Bcl-2表達(dá)的影響；他莫昔芬聯(lián)合60 Coγ線(xiàn)輻照對(duì)SHG44細(xì)胞PI3K／Akt信號(hào)通路的影響；探討他莫昔芬對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞輻射敏感性的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法:采用堿性單細(xì)胞凝膠電泳法檢測(cè)

2、及評(píng)價(jià)膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞DNA損傷及修復(fù)的程度；分光光度計(jì)法檢測(cè)()HG44細(xì)胞Caspase9活性的變化；Western blot法分析PKCα、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表達(dá)變化；Western blot法分析P13K／Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白Akt、p-Akt、p-c-Raf、p-PTEN、p-PDK1、p-GSK-3β蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:1、堿性單細(xì)胞凝膠電泳法檢測(cè)顯示:他莫昔芬加重了輻射導(dǎo)致的膠質(zhì)瘤細(xì)胞

3、SHG44的DNA鏈初始損傷,處理后即刻照射聯(lián)合藥物組較單獨(dú)輻照組OTM值增加89.5％(p<0.05)；隨著時(shí)間的延長(zhǎng),各實(shí)驗(yàn)組OTM值逐漸變小,處理后2h除輻照聯(lián)合藥物組仍有明顯損傷殘留外其余組均接近完全修復(fù)。2、分光光度計(jì)法數(shù)據(jù)顯示處理后各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比Caspase9活性均增高,48h時(shí)各實(shí)驗(yàn)組的Caspase9活性與相對(duì)應(yīng)的24h結(jié)果相比均明顯升高(p<0.05)；相同時(shí)間點(diǎn)藥物聯(lián)合輻照組與對(duì)照組、單獨(dú)藥物組和單獨(dú)輻照組相

4、比,Caspase9活性明顯升高(p<0.05)；10μ mol／L+4Gy組Caspase9活性明顯高于10μmol／L+2Gy組,24h和48h時(shí)Caspase9活性分別增加21.9％和73.4％(p<0.05)。3、Western blot檢測(cè)提示他莫昔芬增強(qiáng)輻照下調(diào)PKCα蛋白表達(dá)的作用,與單獨(dú)輻照組相比聯(lián)用后在24 h時(shí)蛋白表達(dá)分別降低38.3％和43.1％,48 h降低53.0％和27.7％；輻照誘導(dǎo)Cyclin D1蛋白表

5、達(dá)量增加,聯(lián)合作用后蛋白表達(dá)明顯下調(diào),與單獨(dú)輻照組相比聯(lián)用后在24 h時(shí)蛋白蛋白表達(dá)分別降低61.7％和72.6％,48 h降低49.3％和51.5％；他莫昔芬增強(qiáng)輻照下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)的作用,與單獨(dú)輻照組相比聯(lián)用后在24 h時(shí)蛋白表達(dá)分別降低34.7％和27.5％,48 h降低51.4％和45.5％。4、Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,輻照聯(lián)合藥物組Akt、p-c-Raf、p-PDK1蛋白表達(dá)與其他組無(wú)明顯差別。輻照誘導(dǎo)p-

6、Akt蛋白表達(dá)量增加,聯(lián)合作用后蛋白表達(dá)明顯下調(diào),與單獨(dú)輻照組相比聯(lián)用后在24 h時(shí)蛋白表達(dá)分別降低21.4％和31.6％,48 h降低33.9％和53.7％；他莫昔芬增強(qiáng)輻照上調(diào)p-PTEN蛋白表達(dá)的作用,與單獨(dú)輻照組相比聯(lián)用后在24 h時(shí)蛋白表達(dá)分別增高31.4％和20.6％,48 h增高10.9％和25.6％；他莫昔芬與輻照聯(lián)用后p-GSK-3β蛋白表達(dá)明顯下調(diào),與單獨(dú)輻照組相比聯(lián)用后在24 h時(shí)蛋白表達(dá)分別降低28.1％和47.

7、2％,48 h降低42.4％和53.4％。
　　 結(jié)論:(1)10μM他莫昔芬增強(qiáng)輻照所致的DNA鏈初始損傷,延緩DNA損傷修復(fù)的過(guò)程。
　　 (2)10μ M他莫昔芬提高輻照誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)Caspase9活性水平,增加輻射誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體途徑的凋亡反應(yīng)
　　 (3)10μ M他莫昔芬聯(lián)合輻射下調(diào)PKCα、Cyclin D1、Bcl-2、p-Akt及p-GSK-3β的蛋白表達(dá),上調(diào)p-PTEN蛋白的表達(dá),對(duì)p-c-Ra