沉默HepG2細(xì)胞內(nèi)源FNBP1基因表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)重塑.pdf

1、目的:篩選FNBP1基因的有效siRNA片段,并轉(zhuǎn)入人肝癌細(xì)胞HepG2中,觀察FNBP1沉默后,HepG2細(xì)胞在形態(tài)、活力、周期等方面的變化。
　　 方法:運(yùn)用基因芯片、RT-PCR、western blot驗(yàn)證FNBP1在細(xì)胞中的存在；合成三組siRNA-FNBP1及陰性對(duì)照,轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,通過(guò)RT-PCR篩選最有效干擾片段；轉(zhuǎn)染經(jīng)篩選有效的siRNA片段,用RT-PCR和Western blot檢測(cè)siRNA-FNB

2、P1的干擾效率；通過(guò)HE染色、XTT、FCM觀察轉(zhuǎn)染siRNA-FNBP1后,HepG2細(xì)胞在形態(tài)、細(xì)胞活力及周期等方面的變化。
　　 結(jié)果:通過(guò)基因芯片、RT-PCR及Western blot驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),FNBP1在人類(lèi)肝癌細(xì)胞HepG2中穩(wěn)定表達(dá)；通過(guò)篩選確定干擾效果最理想的siRNA序列為5’-CCCACUUCAUAUGUCGAAGUCUGUU-3’；干擾后RT-PCR及Western blot檢測(cè)表明,siRNA序列已將內(nèi)

3、源FNBP1基因的表達(dá)完全沉默。HepG2細(xì)胞在其內(nèi)源FNBP1基因表達(dá)被沉默后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生重塑,由上皮樣轉(zhuǎn)變?yōu)闃?shù)狀分枝的纖維狀形態(tài)；而細(xì)胞活力和細(xì)胞周期無(wú)顯著變化。
　　 結(jié)論:利用RNA干擾技術(shù)(RNA interference technology,RNAi)沉默肝癌細(xì)胞HepG2內(nèi)源FNBP1基因表達(dá)以后,其細(xì)胞形態(tài)發(fā)生重塑,由上皮樣轉(zhuǎn)變?yōu)闃?shù)狀分枝的纖維狀,表明FNBP1在細(xì)胞形態(tài)維持過(guò)程中亦具有不可或缺的潛在作用；根