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文檔簡介
1、目的:構建靶向FNBP1 siRNA干擾載體并篩選特異高效的RNAi靶點,研究FNBP1基因沉默后對人正常的肝細胞HL-7702體外增殖以及遷移能力的影響。
方法:設計并構建了3個靶向FNBP1 siRNA干擾載體(Si-1,Si-2,Si-3),經酶切和DNA測序鑒定后轉染人正常的肝細胞HL-7702。RT-PCR和Western blot檢測瞬時轉染細胞中FNBP1基因的干擾效率,篩選出特異高效的RNAi靶點。并用G4
2、18篩選穩(wěn)定表達了RNAi的細胞株,用XTT法檢測細胞體外增殖率,劃痕法檢測細胞的遷移能力。
結果:酶切和測序結果證明干擾質粒構建正確;轉染特異性的干擾質粒(Si-1、Si-2、Si-3)細胞的FNBP1基因表達量與對照組相比均有所降低,3個干擾組(Si-1、Si-2、Si-3)細胞的FNBP1基因表達量分別為對照組的(66.4±1.01)％,(24.2±0.81)%,與(44.9±0.92)%,Si-1、Si-2、Si-
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