2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、豬附紅細胞體(Eperythrozoon suis)可以引起豬附紅細胞體病,它主要存在于豬的紅細胞表面、血漿以及骨髓內(nèi),引起主要癥狀有黃疸、發(fā)熱和貧血。
  對于豬附紅細胞體病暫時沒有較好的手段控制,而且已知的功能性基因偏少。因此,本試驗根據(jù)NCBI中公布的豬附紅細胞體基因組序列,PCR擴增獲得包括全基因在內(nèi)1561 bp的吉林株膜蛋白OxaA基因序列,并上傳NCBI(登錄號:YP_004249851.1)。獲得的OxaA基因序列

2、與豬附紅細胞體基因組KI_3806(登錄號:NC_015153)比較,存在21處同義突變,核苷酸序列同源性為98%,氨基酸序列同源性為100%。
  利用ExPASy、CPHmodels數(shù)據(jù)庫及TMHMM等方法對OxaA蛋白的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進行了分析。結(jié)果顯示,OxaA蛋白的理論等電點為9.98,偏堿性;存在多個信號肽可能位點和5個跨膜區(qū)域;二級結(jié)構(gòu)以α螺旋、不規(guī)則卷曲為主;三級結(jié)構(gòu)有明顯的折疊層次; B細胞抗原表位可能存在于20

3、~24位、28~40位、45~53位、142~150位、260~263位氨基酸處;在9-63和122-176氨基酸區(qū)間存在兩個膜外區(qū)片段,暫命名為A和B。
  針對A和B兩段核苷酸序列分別設(shè)計引物,連接于原核表達載體pGEX-4T-1上,經(jīng)IPTG誘導,在大腸桿菌BL-21中表達。SDS聚丙烯酰胺電泳的結(jié)果顯示兩個重組蛋白的大小為33.9 kDa和34.6 kDa,而免疫印跡的結(jié)果說明了兩個重組蛋白均能夠與豬附紅細胞體陽性血清以及

4、GST單抗發(fā)生反應,說明了兩個重組蛋白的反應原性好。其中A蛋白主要以包涵體形式存在,B蛋白為可溶性蛋白。
  重組蛋白A和B以GST標簽樹脂進行了純化,并且分別建立了間接ELISA方法,對兩種方法進行了比較。通過對各條件的篩選,我們確定了重組蛋白B在6.25μg/mL時為最佳包被濃度,3%的脫脂乳的最佳封閉時間為37℃1h;待檢血清最佳稀釋度為1:100,最佳作用時間37℃1h;辣根過氧化物酶標記的兔抗豬二抗最佳稀釋倍數(shù)為1:50

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