白細胞介素-10重組腺病毒載體的構(gòu)建、病毒的制備及表達產(chǎn)物活性分析.pdf

1、目的:該文利用現(xiàn)代分子生物學實驗方法,構(gòu)建mIL-10重組腺病毒載體,制備具有活性的重組腺病毒,并對表達的mIL-10的活性進行分析檢測.為研究IL-10分子生物學及藥理學活性奠定了良好的基礎(chǔ),并為細胞因子補充和添加療法治療哮喘和基因治療哮喘等臨床研究做好了前期準備.方法:從刺激后的小鼠脾細胞中克隆出mIL-10片段,利用pShuttle載體將mIL-10片段連入腺病毒載體,并用PCR反應和酶切反應對構(gòu)建的重組腺病毒載體進行鑒定.分別從

2、磷酸鈣轉(zhuǎn)染的pH值、DNA純度、轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)時間和甘油休克時間等方面優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,根據(jù)最優(yōu)條件,將mIL-10重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染入HEK 293T細胞,制備mIL-10重組腺病毒.分別用PCR反應驗證病毒的制備和終點稀釋檢測法測定病毒的滴度.對mIL-10的表達量和活性,采用ELISA法進行定量和檢測.結(jié)論:該文成功構(gòu)建了mIL-10重組腺病毒載體,并通過對磷酸鈣轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化,高效地將重組腺病毒載體轉(zhuǎn)入HEK 293T細胞,并且成功表達