浙江漢族人群ABO血型等位基因多態(tài)性的研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文浙江漢族人群ABO血型等位基因多態(tài)性的研究姓名：祝宏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：潘建平20090401浙江大學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要11ABO血型表型分析：2008年79月來浙江省血液中心的隨機無償獻血者30519名，通過填寫征詢表確認(rèn)其民族為漢族。12人群中ABO亞型和不規(guī)則抗體調(diào)查：2008年來浙江省血液中心的隨機無償獻血者，共計標(biāo)本數(shù)為167888人次。13ABO血型等位基因分布情況：標(biāo)本來自2

2、008年79月浙江省血液中心的隨機無償獻血者。所有標(biāo)本經(jīng)其知情同意后采集5mlEDTA抗凝血，分別吸取12ml血樣貯存在20。C以下備用。標(biāo)本總數(shù)為417例。2、血清學(xué)方法測定21ABO表型檢測：采用PK7200全自動血型檢測系統(tǒng)測定ABO血清學(xué)表型，參照儀器說明書進行操作。22ABO亞型鑒定：對于正反定型不一致或者疑是亞型的標(biāo)本進行鑒定，采用試管法，具體參照中心參比實驗有關(guān)操作說明進行。23不規(guī)則抗體鑒定采用凝集技術(shù)在PK7200自動

3、血型檢測系統(tǒng)檢測。3、標(biāo)本DNA提取：采用QIAampBloodKit商用抽提試劑盒。4、ABO基因第67外顯子測序分析41PCR擴增：PCR擴增引物序列參照ABO基因序列，采用一對引物對進行57外顯子擴增，PCR引物序列和擴增條件參照正文，擴增反應(yīng)體系總體積為25I，tl。42PCR產(chǎn)物純化：每孔中加入核酸外切酶Ilp1(5U)，蝦堿性磷酸酶2pl(2U)，ABI公司的9700型PCR自動擴增儀進行酶切反應(yīng)，37。C60min，80。

4、C15min。43測序反應(yīng)：分別針對外顯子6、7設(shè)計四個測序引物，以純化PCR產(chǎn)物為模板按BigDyeSequencingkit(ABI公司)試劑盒操作進行測序反應(yīng)，ABI公司9700型PCR自動擴增儀擴增，擴增條件為95“C預(yù)變性5min，95。C10s，50。C10s，60℃4min，25個循環(huán)，冷卻至4℃。44測序反應(yīng)純化和電泳分析：采用乙醇／醋酸鈉法純化，然后在ABI3730測序儀上進行測序電泳分析。45測序結(jié)果分析和判斷：Se