SLC20A1與Psma7相互作用研究.pdf

1、SLC20A1定位于2q13，由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，該基因編碼膜蛋白Pit1，Pit1是在大多數(shù)真核生物中表達(dá)的Ⅲ型鈉-磷協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白之一，在體內(nèi)無(wú)機(jī)磷向胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前的觀點(diǎn)認(rèn)為Pit1通過(guò)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的磷吸收為血管鈣化所需的羥基磷灰石形成提供了條件，從而在鈣化過(guò)程中起到關(guān)鍵的作用。為了研究SLC20A1引起血管鈣化發(fā)生的分子機(jī)制。本論文通過(guò)截取SLC20A1胞內(nèi)親水Loop環(huán)的編碼序列構(gòu)建釣餌載體，

2、并利用SMARTTM技術(shù)成功構(gòu)建了小鼠胎腦cDNA文庫(kù)，文庫(kù)經(jīng)過(guò)鑒定后，完整性和代表性均符合實(shí)驗(yàn)要求。隨后利用酵母雙雜交系統(tǒng)從構(gòu)建的文庫(kù)中篩選可能與Pit1相互作用的蛋白質(zhì)，結(jié)果篩選到了一個(gè)新的與其相互作用的蛋白Psma7。
　　Psma7是20S蛋白酶體核心復(fù)合物的α4亞基。20S蛋白酶體與19S蛋白酶體一起組成26S蛋白酶體復(fù)合物，在體內(nèi)參與泛素化-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）中而起作用。
　　為了進(jìn)一步探究Pit1與Psma

3、7相互作用引起血管鈣化的可能機(jī)制，研究了兩者之間是否在體內(nèi)環(huán)境下存在相互作用。成功構(gòu)建了帶有GFP標(biāo)簽的Psma7表達(dá)載體，以及帶有Flag標(biāo)簽的Pit1表達(dá)載體，通過(guò)Co-IP實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了Pit1與Psma7的相互作用。并進(jìn)一步利用免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)證明了Psma7與Pit1在細(xì)胞內(nèi)是共定位的。
　　本次研究首次發(fā)現(xiàn)了與Pit1相互作用的一個(gè)新的蛋白Psma7，并且初步證明了它們?cè)谖锢砩虾凸δ苌洗_實(shí)存在相互作用。這為解釋Pit1