PTPN22與PADI4相互作用的研究.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種常見(jiàn)的、慢性的、自身免疫系統(tǒng)失調(diào)的自身性免疫疾病。臨床發(fā)現(xiàn)該病的主要特征是關(guān)節(jié)、骨骼等部位發(fā)生炎癥，發(fā)病過(guò)程中引發(fā)關(guān)節(jié)的壞死以及骨骼的侵蝕，最終將導(dǎo)致患者關(guān)節(jié)的畸形及其功能的喪失。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因尚不明確。PTPN22，即蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型22，目前認(rèn)為該基因編碼的淋巴酪氨酸磷酸酶可以影響 T細(xì)胞活化，從而影響免疫穩(wěn)態(tài)而導(dǎo)致自身免疫病的發(fā)生。PADI4，即肽基精氨酸脫亞胺酶4，為編碼精氨酸轉(zhuǎn)化為瓜氨酸殘基的酶家

2、族的成員，可在粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，因而可能與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病相關(guān)。PADI4是一種翻譯后修飾酶，可以在鈣離子存在的情況下把精氨酸殘基轉(zhuǎn)化成瓜氨酸殘基，此過(guò)程稱作瓜氨酸化。PADI4與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎最密切相關(guān)，哺乳動(dòng)物的PAD受細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度、自動(dòng)瓜氨酸化和二聚化的調(diào)控蛋白質(zhì)瓜氨酸化的改變可能可以解釋類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的風(fēng)險(xiǎn)因素，有研究猜測(cè)，PTPN22R620可能與PADI4相互作用，從而限制了瓜氨酸化以及中性

3、粒細(xì)胞胞外殺菌網(wǎng)絡(luò)的形成。PTPN22R620是天然的PADI4的抑制劑，但是 PTPN22W620完全剝奪了PTPN22對(duì) PADI4的抑制作用導(dǎo)致高度瓜氨酸化。而目前對(duì)于PTPN22和PADI4的相互作用依然不是很清晰，其中主要的限制因素是難以得到大量、均一度高的PTPN22和PADI4蛋白，從而造成其數(shù)據(jù)的缺乏。
　　本論文針對(duì)這一難題，探索了PTPN22和PADI4在大腸桿菌這一原核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)，并對(duì)二者相互作用關(guān)系進(jìn)

4、行了研究。通過(guò)優(yōu)化大腸桿菌的培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)濃度，明顯改善了蛋白的表達(dá)量、行為及純度。通過(guò)親和層析、離子交換層析、凝膠過(guò)濾色譜層析等方法提高了蛋白純度，最終能夠在體外得到具有較高濃度、較高純度的、行為較為均一的PTPN22和PADI4蛋白。然而，個(gè)別 PTPN22重組蛋白和PADI4蛋白可以實(shí)現(xiàn)共表達(dá)，純化得到的PTPN22和PADI4蛋白之間并不存在相互作用。本研究加深了我們對(duì)于PTPN22和PADI4蛋白的整體認(rèn)識(shí)，為將來(lái)的