食管鱗狀細胞癌細胞株MT-3基因CpG島超甲基化的意義.pdf

1、食管癌是我國高發(fā)的惡性腫瘤。其發(fā)生是多種癌基因的激活與抑癌基因的失活長期協(xié)同作用的結(jié)果?；虍惓＜谆悄壳八某蛔?、缺失和移位之外的另一種基因異常改變，與其它基因異常相比，基因的甲基化研究不僅對惡性腫瘤的病因、早期診斷及預后評價有很大價值，而且對腫瘤的基因治療研究有著重要的作用。目前已知，MT-3基因是細胞內(nèi)一種金屬硫蛋白的編碼基因，不僅具有許多重要的生理功能，還可以抑制細胞增殖，已有研究發(fā)現(xiàn)MT-3基因在胃癌中存在異常甲基化。本

2、課題應用MSP和RT-PCR方法檢測食管鱗狀細胞癌細胞株中的MT-3基因的甲基化情況及其對MT-3基因mRNA表達的影響，以揭示MT-3基因甲基化在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法 1 選取五種食管癌細胞株和正常人血液單核細胞，其中TE-1，TE-13，TTN和ECA-109為食管鱗狀細胞癌細胞株，0E33為食管腺癌細胞株，應用RT-PCR技術(shù)，對其mRNA的表達情況進行研究，旨在揭示MT-3基因RNA表達與食管鱗狀細胞

3、癌發(fā)生的關(guān)系。 2 選取TE-1，TE-13，1TN，ECA-109和OE33五種食管癌細胞株，應用MSP技術(shù)，對其MT-3基因CpG島的超甲基化情況進行研究，從而了解MT-3基因CpG島的超甲基化狀況與食管鱗狀細胞癌發(fā)生的關(guān)系。 3 應用RT-*PCR技術(shù)和MSP技術(shù)對五種食管癌細胞株經(jīng)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理后進行研究，包括MT-3基因CpG島甲基化情況和MT_3基因m

4、RNA表達量的研究，以闡明MT-3基因CpG島的甲基化和MT-3基因mRNA表達與食管鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 結(jié)果 1 MT-3基因mRNA在試驗的細胞中均有不同程度的表達。其中正常人血液單核細胞的MT-3表達量最大，其次為TE13，而OE33沒有表達。 2 所有實驗的食管鱗狀細胞癌細胞株中MT-3基因mRNA的表達量明顯低于正常人血液單核細胞的表達量(P<0.01)。 3 MSP結(jié)果顯示食管鱗

5、狀細胞癌細胞株中廣泛存在MT-3基因CpG島的甲基化，其中以TE1最重，沒有非甲基化引物擴增產(chǎn)物，處于完全甲基化狀態(tài)。其余三種食管鱗狀細胞癌細胞株甲基化程度相對較弱，為半甲基化狀態(tài)。 4 MSP結(jié)果顯示經(jīng)5-Aza-CdR處理后五種食管癌細胞株的MT-3基因超甲基化狀態(tài)均發(fā)生了去甲基化改變，最為明顯的是TEl3和OE33，TEl3細胞株基本上發(fā)生了完全去甲基化，OE33細胞株也出現(xiàn)了明顯的非甲基化引物擴增產(chǎn)物。 5

6、各細胞株經(jīng)5-Aza-CdR處理后mRNA表達量較處理前明顯增多(P<0.01)。 結(jié)論 1 食管癌細胞株中存在不同程度的MT-3蛋白表達，其中OE33完全沒有發(fā)現(xiàn)MT-3蛋白表達，其余四種食管鱗狀細胞癌細胞株可檢測到多少不等的MT-3蛋白表達。 2 實驗的所有食管鱗狀細胞癌細胞株的MT-3蛋白表達量明顯低于正常人血液單核細胞的表達量，即食管鱗狀細胞癌細胞株中存在廣泛的MT-3蛋白表達水平下降。 3

7、 實驗的所有食管鱗狀細胞癌細胞株的MT_3基因CpG島廣泛存在超甲基化。 4 MSP結(jié)果顯示：經(jīng)5-Aza-CdR處理后的四種食管鱗狀細胞癌細胞株中的MT-3基因CpG島超甲基化狀態(tài)均發(fā)生了不同程度的去甲基化改變。 5 食管鱗狀細胞癌細胞株中廣泛存在MT-3基因CpG島的超甲基化，而且這些甲基化可以引起MT-3蛋白表達水平的下降。經(jīng)5-Aza-CdR處理后，MT-3基因的甲基化狀態(tài)解除，MT-3蛋白的表達水平也相應地