大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)的制備及組織相容性研究.pdf

1、目的：探討大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)（Acellular bone extracellular matrix ,ABECM)的制備及組織相容性,為其在骨缺損修復(fù)領(lǐng)域中的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　 方 法：取牛股骨下端松質(zhì)骨切割制作4.0 cm×2.0 cm×2.0 cm及4.0 cm×2.0 cm×1.0 cm大小的骨塊，兩種骨塊分別用10% NaCl和0.5%曲拉通X-100聯(lián)合脫細(xì)胞處理，分為48 h.72 h.96 h三個時間

2、段；處理后的大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)行HE染色，Masson染色及掃描電鏡觀察，觀察大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)的脫細(xì)胞程度；用處理后的大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)制作浸提液，行急性毒性實驗、熱源實驗，觀察大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)有沒有毒性反應(yīng)及熱源性；用處理后的大塊異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)材料與SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長、細(xì)胞增殖及蛋白質(zhì)含量測定。
　　 結(jié) 果:（1）4.0cm×2.0cm×1.0cm經(jīng)過10%NaCl和0.5%曲拉

3、通X-100聯(lián)合處理72h、96h及4.0 cm×2.0cm×2.0cm經(jīng)過10%NaCl和0.5%曲拉通X-100聯(lián)合處理96h三組的異種ABECM經(jīng)HE染色及掃描電鏡觀察未見細(xì)胞成分，Masson染色觀察膠原纖維基本結(jié)構(gòu)未被破壞，材料浸提液急性毒性實驗、熱源實驗符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，且骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠貼附在異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)孔隙內(nèi)生長,細(xì)胞生長及蛋白合成功能不受異種脫細(xì)胞骨基質(zhì)的影響。（2）4.0cm×2.0cm×1.0cm經(jīng)過10%Na

4、Cl和0.5%曲拉通X-100聯(lián)合處理48h 及4.0cm×2.0cm×2.0cm經(jīng)過10%NaCl和0.5%曲拉通X-100聯(lián)合處理48h、72h三組的異種ABECM與BMSCs復(fù)合培養(yǎng)，通過細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞蛋白含量測定，在試驗后期對照組在細(xì)胞數(shù)量及蛋白含0量上都多于實驗組，表明上述三組大塊異種ABECM脫細(xì)胞程度不完全，對BMSCs的生長有一定的影響。
　　 結(jié) 論:（1）本試驗制備復(fù)合條件的大塊異種ABECM,說明利用高滲N