組織工程和再生醫(yī)學中脫細胞生物基質(zhì)的制備及其生物相容性研究.pdf

1、該研究通過對0.25﹪胰酶不同脫細胞時間處理、不同濃度胰酶處理、Dispase脫細胞法、1M、2M高滲鹽水脫細胞法、高滲鹽水和胰酶工Dispase混合脫細胞法的比較確認采用0.125﹪胰酶,4℃,24小時可脫盡豬真皮內(nèi)細胞;胰酶脫細胞法和Dispase脫細胞法在病理切片上無顯著性差異,而單純的高滲鹽水脫細胞方法的可行性值得商榷,至于高滲鹽水和胰酶或Dispase混合脫細胞法,它與單純的胰酶或Dispase脫細胞法無顯著性差異.實驗對脫細

2、胞后基質(zhì)中細胞碎片的清除進行了比較研究選用了0.5﹪Triton X-100和0.5﹪SDS,對比研究后發(fā)現(xiàn),用0.5﹪Triton X-100及其與0.5﹪SDS的1：1.25、1：1、1：0.75、1：0.5、1：0.25、1：0.125混合液洗滌,按該實驗方法效果不佳,而0.5﹪SDS振蕩洗滌3小時可較好地清除細胞碎片.但是,經(jīng)這樣洗滌清除細胞碎片后基質(zhì)的物理性能與洗滌前相比顯著降低.研究中發(fā)現(xiàn)真皮基質(zhì)經(jīng)脫細胞后其膠原結(jié)構(gòu)崩解,為

3、防止膠原結(jié)構(gòu)崩解對基質(zhì)進行脫細胞前用戊二醛固定.實驗發(fā)現(xiàn)4﹪戊二醛對基質(zhì)交聯(lián)固定后,若交聯(lián)時間短,則與不交聯(lián)組無差異時間稍長,則胰酶無法脫除細胸.為了提高脫細胞后基質(zhì)的強度和調(diào)控基質(zhì)體內(nèi)降解速率,實驗選擇了戊二醛對脫細胞生物基質(zhì)交聯(lián)固定,結(jié)果顯示戊二醛可以大大提高經(jīng)SDS洗滌后脫細胞基質(zhì)的物理性能.α-半乳糖殘基是豬到人的主要異種抗原,會導致超急性免疫排斥,要實現(xiàn)豬到人的異種移植首先要去除的就是α-Gal.所以實驗對制備的基質(zhì)進行了α-

4、Gal的定性測試.免疫組化結(jié)果顯示經(jīng)胰酶和Dispase處理后及SDS洗滌后的脫細胞基質(zhì)均無α-Gal活性.實驗測定了脫細胞基質(zhì)的細胞毒性,結(jié)果表明,經(jīng)SDS洗滌及戊二醛交聯(lián)固定后的基質(zhì)應進行嚴格清洗,否則會表現(xiàn)細胞毒性,這主要是因為SDS洗滌后會殘留于基質(zhì)中,而且洗脫比較困難,但是只要徹底清洗,采用該實驗方法仍可做到基質(zhì)細胞毒性.通過對基質(zhì)進行鼠成纖維細胞培養(yǎng)、種植上的細胞形態(tài)學掃描電鏡觀察及在兔觀肉和皮下組織相容性觀察,可以初步認定