PCBP2在病毒誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生I型干擾素中的作用.pdf

1、PCBP2是核不均一核糖核蛋白(hnRNP)家族成員之一，能特異性結(jié)合富含胞嘧啶RNA片段，在細(xì)胞生理過程中發(fā)揮著重要的作用，例如參與轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控、與microRNA、蛋白相互作用。PCBP2也是宿主細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子之一，近些年研究PCBP2與病毒之間的相互關(guān)系的報(bào)道越來越多，發(fā)現(xiàn)PCBP2能參與多種病毒RNA的復(fù)制過程，還能調(diào)控細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)。PCBP2影響丙型肝炎病毒(HCV)、新城疫病毒(NDV)病毒RNA的復(fù)制已有報(bào)道，但

2、是PCBP2在病毒誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生Ⅰ型干擾素中的具體作用卻未見報(bào)道。
　　 本文主要探討了PCBP2在病毒誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生Ⅰ型干擾素中的作用，首先我們設(shè)計(jì)了沉默PCBP2基因的shRNA，將其插入到新型載體pSilencer后轉(zhuǎn)染到肝細(xì)胞HLCZ01中，成功建立了對PCBP2基因沉默效果在60％-90％左右的穩(wěn)定細(xì)胞系。以此為基礎(chǔ)，我們使用了體外合成的的雙鏈RNA試劑poly(I∶C)刺激細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默PCBP2，細(xì)胞內(nèi)IFNβ

3、的表達(dá)量上調(diào);使用單股負(fù)鏈RNA病毒NDV感染細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)沉默PCBP2，細(xì)胞內(nèi)NDV水平下調(diào)，但是IFNβ以及其下游四種干擾素刺激基因ISG12a、ISG56、ISG60以及G1P3的表達(dá)量明顯上調(diào);最后采用單股正鏈RNA病毒HCV感染細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)沉默PCBP2可抑制HCV的復(fù)制水平，同時(shí)促進(jìn)IFNβ以及ISG12a、ISG56、ISG60以及G1P3的表達(dá)水平。由此可見，沉默PCBP2，細(xì)胞內(nèi)病毒量下調(diào)，IFNβ表達(dá)水平上調(diào)，PCBP2