葡聚糖包被的納米液態(tài)氟碳脂質(zhì)乳劑：一種潛在的多功能靶向造影劑.pdf

1、第一章DTPA-甘露糖．葡聚糖體外靶向試驗(yàn) 目的：通過(guò)一種鈣離子依賴(lài)的受體結(jié)合反應(yīng)，證實(shí)一種靶向分子載體N一雙羥乙基氨基酸與二乙三胺五乙酸．甘露糖．葡聚糖(DTPA．Mannosyl-Dextran)的甘露糖受體靶向性能。我們的最終目標(biāo)是開(kāi)發(fā)一種能夠攜帶靶向物質(zhì)的大分子載體。 方法：DTPA-Mannosyl．dextran(MW=35,800g／mol，每摩爾葡聚糖分子含56摩爾甘露糖分子)用異硫氰酸熒光黃染料(FIT

2、C)標(biāo)記后用于實(shí)驗(yàn)。巨噬細(xì)胞株J-774按105個(gè)／孔種植于24孔板內(nèi)的圓形蓋玻片上培養(yǎng)，24小時(shí)后用3．O％多聚甲醛(paraformaldehyde，w／v用PBS緩沖液配制)固定。然后用藍(lán)色DNA熒光染料(Hoechst)標(biāo)記巨噬細(xì)胞核，在用PBS緩沖液清洗后在37~C與FITC-DTPA-Mannose-dextran分別在結(jié)合液(含鈣離子)、非結(jié)合液(不含鈣離子)中孵育20分鐘。然后清洗、固定后用共聚焦顯微鏡觀測(cè)。 結(jié)

3、果：空白對(duì)照組只見(jiàn)巨噬細(xì)胞核Hoechst發(fā)出藍(lán)色熒光，未見(jiàn)細(xì)胞邊緣(表面)發(fā)出任何FITC綠色標(biāo)記熒光；結(jié)合液組可見(jiàn)細(xì)胞邊緣FITC綠色熒光，與細(xì)胞核的藍(lán)色熒光之間的黑色區(qū)域?yàn)榧?xì)胞漿；非結(jié)合液組細(xì)胞邊緣無(wú)或極淡綠色熒光。各試驗(yàn)組所測(cè)細(xì)胞邊緣熒光強(qiáng)度值減去背景熒光強(qiáng)度值為實(shí)際值。1：2稀釋、1：10稀釋、1：50倍稀釋mannosyl-dextran加結(jié)合液組細(xì)胞邊緣熒光強(qiáng)度實(shí)際值分別為：707．94~94．88、441．59~101．

4、62、378．92~104．63；1：2稀釋、1：10稀釋、l：50倍稀釋mannosyl-dextran加非結(jié)合液組細(xì)胞邊緣熒光強(qiáng)度值分別為：144．98±153．58、125．39±44．67、105．81±43．15。獨(dú)立樣本student-t檢驗(yàn)結(jié)果顯示1：2稀釋、1：10稀釋、1：50倍稀釋mannosyl-dextran加結(jié)合液組細(xì)胞邊緣熒光強(qiáng)度值與l：2稀釋、1：10稀釋、1：50倍稀釋mannosyl-dextran加非

5、結(jié)合液組細(xì)胞邊緣熒光強(qiáng)度值之間均有顯著性差異(p

6、射劑量放射強(qiáng)度百分比(％ID)，然后根據(jù)PET檢測(cè)結(jié)果得出各臟器動(dòng)態(tài)％ID并作圖。非核素標(biāo)記的DTPA-mannosyl-dextran包被的納米氟碳乳劑和DTPA-dextran包被的納米氟碳乳劑被用于微螺旋CT實(shí)驗(yàn)。在注射前與注射后4小時(shí)分別用微螺旋CT掃描。所獲斷層CT圖像被用于測(cè)量肝、脾的CT值。 結(jié)果：葡聚糖包被的納米氟碳乳劑的直徑介于70nnl與90Bin之間。每摩爾納米微粒大約與140摩爾葡聚糖分子相連。動(dòng)態(tài)放射強(qiáng)

7、度百分比(％ID)圖顯示在DTPA-mannosyl-dextran包被的納米液態(tài)氟碳乳劑組內(nèi)肝臟的％ID逐漸增加而血中的％ID逐漸下降，而在對(duì)照組內(nèi)卻無(wú)此現(xiàn)象。在注射后第20分鐘，肝、脾內(nèi)放射強(qiáng)度與對(duì)照組放射強(qiáng)度比較有顯著差別(P<0．01)。微螺旋CT結(jié)果顯示注射后4小時(shí)，DTPA-mannosyl-dextran包被的納米氟碳乳劑相對(duì)于不含甘露糖的DTPA-dextran包被的納米氟碳乳劑聚集到肝臟的數(shù)量明顯多于對(duì)照組。

8、結(jié)論：活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明了DTPA-mannosyl-dextran包被的納米液態(tài)氟碳乳劑對(duì)甘露糖受體的靶向性能。 第三章生物素化的納米液態(tài)氟碳脂質(zhì)乳劑體外聚集初步實(shí)驗(yàn)研究 目的：制備一種可以靶向聚集的納米液態(tài)氟碳脂質(zhì)乳劑，以證明聚集后的納米液態(tài)氟碳乳劑能夠增強(qiáng)超聲顯像的性能。 方法：用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)技術(shù)與高壓均質(zhì)技術(shù)制備生物素化的納米液態(tài)氟碳脂質(zhì)乳劑(60％w／v)。將該氟碳乳劑1Oml進(jìn)行1：5倍稀釋?zhuān)缓笕?0只玻

9、璃試管，每管加入氟碳乳劑稀釋液1ml。分別向每只試管內(nèi)加入如下劑量的親和素溶液0．01mg，O．02mg，O．04mg，O．08mg，O．16mg，0．32mg，0．64mg，1．28mg，138mg，1．48mg，1．58mg，1．68mg。靜置約5分鐘后，肉眼觀測(cè)溶液外觀變化，然后分別取20~tl試管底部溶液用數(shù)碼顯微鏡觀察。將100ml生物素化的液態(tài)氟碳乳劑100倍稀釋后滴加親和素進(jìn)行超聲顯像觀察。 結(jié)果：肉眼觀察：空白對(duì)

10、照組即未加親和素組：溶液呈均勻不透明乳液狀；加入0．0lmg親和素組：溶液外觀無(wú)明顯肉眼變化，但試管底部似乎有極少許沉淀；加入O．02mg親和素組：溶液可見(jiàn)分為兩層，上層依然呈乳劑狀，但下層為白色沉淀物；加入O．04mg親和素組：溶液下層沉淀物增多，上層乳劑顏色變淺；加入O．08mg，O．16mg，0．32mg，0．64mg親和素組：溶液上層顏色逐漸變淺，下層沉淀物逐漸增多；加入1．28mg親和素組：溶液上層已變透明，下層見(jiàn)多量沉淀物；

11、加入1．38mg，1．48mg，1．58mg，1．68mg組：下層沉淀物不再增加，上層溶液清澈透明，但溶液上方的管壁可見(jiàn)明顯的沉淀物附著。顯微鏡觀察：空白對(duì)照組即未加親和素組：整個(gè)顯微視野為均勻分散的乳劑，未見(jiàn)凝集現(xiàn)象。加入O．Olmg，O．02mg，O．04mg，O．08mg，O．16mg，0．32mg，0．64mg，1．28mg，l38mg，1．48mg，1．58mg，1．68mg組，從底部所取溶液無(wú)含大量氟碳乳劑聚集沉淀物。超聲顯