動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程中Apelin-13的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的：以人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為體外細(xì)胞模型，研究apelin-13對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響，以及對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)和血管細(xì)胞粘附分子(VCAM-1)表達(dá)的影響，目的是為了檢測(cè)apelin-13對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程的影響，及其通過(guò)的細(xì)胞信號(hào)通路。
　　 內(nèi)容：培養(yǎng)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)，提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄、PCR檢測(cè)HASMC細(xì)胞

2、中是否有APJ-血管緊張素受體相關(guān)的受體蛋(putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1，APJ)的表達(dá)，用不同濃度(0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM，10μM)的apelin-13刺激細(xì)胞24，48，72小時(shí)，MTT比色法觀察apelin-13對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響；用不同濃度(0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM

3、，10μM)的apelin-13刺激細(xì)胞4小時(shí)，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察apelin-13對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移的影響。
　　 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄、PCR檢測(cè)HUVEC細(xì)胞中是否有APJ的表達(dá)，用不同濃度(0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM，2μM)的apelin-13刺激細(xì)胞0，3，5，8，12，24小時(shí)，尋找apelin-13促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1，ICAM-1表達(dá)的最

4、佳濃度和最適時(shí)間；apelin-13以最適濃度和最適時(shí)間和Gi蛋白抑制劑PTX或Gq蛋白抑制劑YM254890共同刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，以LPS為陽(yáng)性對(duì)照來(lái)鑒定apelin-13促VCAM-1，ICAM-1表達(dá)所通過(guò)受體偶聯(lián)的G蛋白類(lèi)型；apelin-13與核因子NFκ-B抑制劑BAY11-7082共同刺激細(xì)胞，檢測(cè)NF-κB在apelin-13促VCAM-1，ICAM-1表達(dá)中的作用；用apelin-13與和Gi蛋白抑制劑PTX或Gq

5、蛋白抑制劑,YM254890共同刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，檢測(cè)NF-κB磷酸化情況，進(jìn)一步檢測(cè)受體偶聯(lián)G蛋白類(lèi)型。
　　 結(jié)果：測(cè)序結(jié)果顯示在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中均有APJ受體表達(dá)；MTT、比色法結(jié)果顯示apelin-13不能促使人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖；traswell法細(xì)胞遷移結(jié)果顯示apelin-13不能促使人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移；Westernblot結(jié)果顯示：apelin-13能夠促使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VC

6、AM-1、ICAM-1的表達(dá)，并且在濃度為0.1μM時(shí)這種促進(jìn)作用達(dá)到最大值，在時(shí)間為8h時(shí)這促表達(dá)作用達(dá)到最大值；在apelin-13促VCAM-1、ICAM-1表達(dá)過(guò)程中，能促使核因子NF-κB的磷酸化，用apelin-13刺激PTX預(yù)處理的細(xì)胞時(shí)，這種促VCAM-1、ICAM-1表達(dá)的作用被抑制，而且用apelin-13刺激PTX預(yù)處理的細(xì)胞時(shí)，核因子NF-κB的磷酸化也被PTX所抑制。
　　 結(jié)論與意義：1)在人主動(dòng)脈平

7、滑肌細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中均有APJ表達(dá)。2)apelin-13對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移沒(méi)有影響。3)apelin-13能夠促使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1、ICAM-1的表達(dá)，apelin-13可能通過(guò)Apelin-13受體APJ-Gi蛋白-NF-κB信號(hào)通路促I(mǎi)CAM-1表達(dá)；Apelin-13可能通過(guò)Apelin-13受體APJ-Gi蛋白-NF-κB3信號(hào)通路促VCAM-1表達(dá)；apelin-13在動(dòng)脈粥樣硬化形成早期