版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)在約50%以上的卵巢癌中表達(dá)水平升高,與腫瘤的增生和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,是極具潛力的基因治療靶點(diǎn)[1]。 RNA干擾(RNA interference,RNAi)是由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介導(dǎo)的,序列特異的基因沉默現(xiàn)象。通過長度為21~23個核苷酸(nucleotide,nt)的雙鏈小干擾RNA(sm
2、all interfering RNA,siRNA)與細(xì)胞內(nèi)相對應(yīng)的mRNA結(jié)合,激活內(nèi)源性RNA內(nèi)切酶,特異性降解mRNA,從而抑制蛋白表達(dá)。RNA干擾技術(shù)能特異、高效、快速地抑制靶基因的表達(dá),已廣泛應(yīng)用于基因治療的研究[2-3]。 目前,應(yīng)用RNAi技術(shù)抑制卵巢癌EGFR表達(dá)方面的研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本課題通過化學(xué)合成的siRNA抑制人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞EGFR的表達(dá),探討其生物學(xué)特性的改變,為卵巢癌基因治療提供一定
3、的理論依據(jù)。 本課題共分三個部分:①RNAi技術(shù)抑制人卵巢癌細(xì)胞株EGFR表達(dá);②干擾EGFR基因表達(dá)對SKOV3細(xì)胞增殖力的影響;③干擾EGFR基因表達(dá)對SKOV3細(xì)胞粘附、移行和侵襲行為的影響。 第一部分 RNAi技術(shù)抑制人卵巢癌細(xì)胞株EGFR表達(dá) 目的:探討采用化學(xué)合成小干擾RNA(siRNA)介導(dǎo)的RNA干擾(RNAi)技術(shù)是否能有效抑制人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞EGFR表達(dá)。 方法:(1)測定
4、SKOV3細(xì)胞株EGFR的表達(dá)。(2)體外化學(xué)合成EGFR序列特異性雙鏈RNA(dsRNA-EGFR),與Lipofectamine 2000結(jié)合后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,采用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測EGFR mRNA和蛋白水平的變化,觀察dsRNA-EGFR/Lipofectamine 2000對EGFR表達(dá)的抑制作用。 結(jié)果:SKOV3細(xì)胞株存在EGFR表達(dá)。dsRNA-EGFR/Lipofectamine 2000
5、復(fù)合物轉(zhuǎn)染細(xì)胞可引發(fā)EGFR序列特異性基因沉默效應(yīng),序列特異性dsRNA-EGFR對SKOV3細(xì)胞EGFR mRNA和蛋白的抑制率分別為73.65%和58.94%。與對照組比較,dsRNA-EGFR組細(xì)胞EGFR mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:(1)SKOV3細(xì)胞株存在EGFR表達(dá)。(2)dsRNA-EGFR序列可特異性下調(diào)SKOV3細(xì)胞EGFR基因水平,顯著降低EGFR蛋白表達(dá)。
6、 第二部分干擾EGFR基因表達(dá)對SKOV3細(xì)胞增殖能力的影響 目的:探討應(yīng)用RNAi技術(shù)抑制EGFR基因表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3增殖能力的影響。 方法:應(yīng)用水溶性四唑鹽(WST-1)比色法檢測dsRNA-EGFR下調(diào)EGFR基因表達(dá)后SKOV3細(xì)胞增殖力的變化。 結(jié)果:dsRNA-EGFR組在轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h細(xì)胞增殖抑制率分別為22.54%、35.76%和31.07%,細(xì)胞增殖率明顯下降,與
7、對照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論:RNAi抑制EGFR的表達(dá)可以有效抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖能力。 第三部分干擾EGFR基因表達(dá)對SKOV3細(xì)胞粘附、移行和侵襲行為的影響 目的:探討應(yīng)用RNAi技術(shù)抑制EGFR基因表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3粘附、移動和侵襲力的影響。 方法:采用細(xì)胞粘附和移動實(shí)驗(yàn)檢測dsRNA-EGFR下調(diào)EGFR基因表達(dá)后SKOV3細(xì)胞體外粘附和移動能力的變化,通過細(xì)
8、胞侵襲重建基底膜實(shí)驗(yàn)檢測SKOV3細(xì)胞體外侵襲能力的改變。 結(jié)果:dsRNA-EGFR組30min和90min時的粘附抑制率分別為12.11%和18.66%,均高于對照組細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);轉(zhuǎn)染dsRNA-EGFR后細(xì)胞體外移動和侵襲能力的抑制率分別為25.47%和22.08%,分別與對照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:RNAi抑制EGFR的表達(dá)可以有效抑制卵巢癌細(xì)胞的移動、粘附
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Raptor介導(dǎo)小豆蔻明抑制SKOV3細(xì)胞增殖的作用機(jī)制研究.pdf
- RNA干擾抑制肝星狀細(xì)胞CTGF表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- RNA干擾抑制大鼠肝星狀細(xì)胞CTGF表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- RNA干擾技術(shù)抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞中脂聯(lián)素的表達(dá).pdf
- RNA干擾技術(shù)抑制宮頸癌細(xì)胞低氧誘導(dǎo)因子-1表達(dá)的研究.pdf
- 靶向Livin的microRNA干擾對人卵巢癌細(xì)胞SKOV3體外作用的研究.pdf
- OCT4和SKOV3和SKOV3-DDP卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)差異分析.pdf
- 人參皂苷Rg3抑制人卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲的機(jī)制研究.pdf
- RNA干擾技術(shù)抑制少突膠質(zhì)細(xì)胞nogo-66表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- RNA干擾技術(shù)抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞IKCa1表達(dá)的研究.pdf
- RNA干擾技術(shù)抑制SHBG基因表達(dá)對人滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- EGF對Ezrin在SKOV3細(xì)胞中表達(dá)的影響及Ezrin和EGFR在人卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)分析.pdf
- P7對bFGF刺激的SKOV3細(xì)胞侵襲的抑制作用.pdf
- RNA干擾體外抑制HBeAg表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- IL-24對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用研究.pdf
- RNA干擾技術(shù)抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901中Nanog表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制骨橋蛋白表達(dá)對肝癌細(xì)胞侵襲性的影響.pdf
- 反應(yīng)停對人卵巢癌細(xì)胞株3AO和SKOV3增殖抑制的研究.pdf
- 三氧化二銻對人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3增殖抑制的研究.pdf
- Beclin1和HLA在卵巢癌細(xì)胞SKOV3的表達(dá)情況的研究.pdf
評論
0/150
提交評論