RNA干擾技術(shù)抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901中Nanog表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建并篩選出對(duì)Nanog基因有抑制作用的重組質(zhì)粒pshRNA-Nanog，將其轉(zhuǎn)染入胃癌細(xì)胞SGC-7901中，檢測(cè)胃癌細(xì)胞SGC-7901中Nanog的表達(dá)，及其對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖、周期、凋亡、遷移及侵襲等生物學(xué)行為的影響，為胃癌的基因診斷和治療研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:(1)針對(duì)人Nanog基因構(gòu)建出的干擾質(zhì)粒pshRNA-Nanog，在脂質(zhì)體的介導(dǎo)下將其轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC-7901，

2、通過(guò)熒光顯微鏡觀察其表達(dá)情況，通過(guò)RT-PCR和Western blot檢測(cè)其抑制效率，篩選出抑制率最高的一組;(2)將篩選出的轉(zhuǎn)染效率最高的那組pshRNA-Nanog重組質(zhì)粒用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC-7901中，通過(guò)CCK-8檢測(cè)其對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖情況的影響，通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901的周期及凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)，使用Transwell法驗(yàn)證胃癌細(xì)胞SGC-7901的遷移能力及侵襲能力。
　　 結(jié)果

3、:(1)成功構(gòu)建出重組質(zhì)粒pshRNA-Nanog并成功轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC-7901，熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞中的綠色熒光，通過(guò)RT-PCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示Nanog基因的表達(dá)有降低，并篩選出了對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901抑制率最高的一組pshRNA-Nanog重組質(zhì)粒;(2) CCK-8顯示胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖能力減弱，流式細(xì)胞術(shù)示細(xì)胞周期停滯在S期，凋亡細(xì)胞明顯增多，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示胃癌細(xì)胞S