針刺對糖尿病大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)PKA-CREB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、1.目的：
　　 本研究在DM學(xué)習(xí)記憶障礙模型上,選擇PKA—CREB信號通路作為切入點(diǎn),觀察針刺對大鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響,探討針刺通過調(diào)節(jié)PKA—CREB傳導(dǎo)信號通路對糖尿病腦病大鼠的影響,為針刺治療糖尿病腦病的機(jī)制提供更有效的依據(jù)。
　　 2.材料與方法：
　　 實(shí)驗(yàn)用雄性Wistar大鼠46只,隨機(jī)分為兩組,正常組(NC,normalcontrol)10只,模型組36只。以無菌枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液配制鏈脲佐

2、菌素按50mg/kg劑量向模型組大鼠腹腔內(nèi)注入25mg/ml濃度的鏈脲佐菌素(STZ),造模后第8天作Morris水迷宮行為學(xué)測試,30只動(dòng)物被確認(rèn)為學(xué)習(xí)記憶障礙,再將動(dòng)物隨機(jī)分為3個(gè)組:模型組(DM),針刺組(ACP),BDNF治療組(BD)。選取督脈的“百會”、“大椎”。電針治療(2Hz,3mA),留針20min,1次/2天,共治療10次。BDNF組動(dòng)物椎管內(nèi)注射BDNF(20mg/kg體重,生理鹽水溶液),第一周兩次。動(dòng)物治療三周

3、后,再做行為學(xué)檢測,檢測后,取腦,4℃冰箱過夜至組織塊沉底。對端腦做額狀面冰凍切片,片厚30μm。做原位雜交(PKAmRNA)與免疫組織化學(xué)(BDNF,CREB)檢測。光學(xué)顯微鏡下觀察各組動(dòng)物腦內(nèi)的陽性標(biāo)記物的表達(dá)情況。MIS2000圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行積分光密度測定。
　　 3.結(jié)果：
　　 3.1行為學(xué)檢測結(jié)果
　　 DM模型組在目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比最短,游泳距離的百分比也最短,說明糖尿病組動(dòng)物存在明顯的空間學(xué)

4、習(xí)記憶障礙,針刺治療后動(dòng)物在目標(biāo)象限停留時(shí)間和所游的距離明顯優(yōu)于DM模型組(P<0.05)。
　　 3.2 BDNF免疫組化陽性標(biāo)記物的分布
　　 BDNF免疫組化陽性反應(yīng)神經(jīng)元在海馬區(qū)域的標(biāo)記神經(jīng)元最多,著色最深,體積也較大,大的標(biāo)記細(xì)胞有很長的樹突染色,最長的可伸展到海馬以外,最多的可觀察到五級分支。海馬出現(xiàn)的BDNF標(biāo)記物細(xì)胞比較,正常組Nc最高,BD組次之,ACP組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著性差

5、異(P<0.05)。杏仁核、扣帶回亦有標(biāo)記神經(jīng)元分布,其數(shù)量極著色深度都不及前者。針刺組與模型組比較也有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.3 PKAmRNA原位雜交結(jié)果
　　 PKAmRNA原位雜交結(jié)果顯示,與BDNF陽性標(biāo)記細(xì)胞不同,PKAmRNA陽性標(biāo)記神經(jīng)元不但著色深,而且胞核著色,標(biāo)記細(xì)胞的體積比BDNF陽性標(biāo)記細(xì)胞小,為中等大小最多,形狀均為圓形,樹突無染色,四組海馬陽性標(biāo)記物細(xì)胞比較,正常組Nc最高,ACP組次之

6、,BD組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著性差異(P<0.05)。標(biāo)記物光密度比較,正常組Nc最高,ACP組次之,BD組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著性差異(P<0.05)。杏仁核出現(xiàn)的PKAmRNA標(biāo)記物的光密度比較,四組比較,正常組Nc最高,ACP組次之,BD組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著。
　　 3.4 CREB免疫組化陽性標(biāo)記細(xì)胞分布
　　 CREB免疫組化陽性標(biāo)記神經(jīng)元的

7、體積比BDNF陽性標(biāo)記細(xì)胞小,海馬區(qū)域的標(biāo)記神經(jīng)元最多,著色最深,體積也為中等大小最多,形狀均為圓形,樹突無染色,四組海馬陽性標(biāo)記物細(xì)胞比較,正常組Nc最高,ACP組次之,BD組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著性差異(P<0.05)。標(biāo)記物光密度比較,正常組Nc最高,ACP組次之,BD組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著性差異(P<0.05)。杏仁核的CREB陽性標(biāo)記物與海馬區(qū)域數(shù)量較少,標(biāo)記也較淺,標(biāo)記物光密度比

8、較,正常組Nc最高,ACP組次之,BD組再次之,DM組最低,前三組與DM組比較有顯著性差異(P<0.05)。
　　 4.結(jié)論：
　　 4.1 DM學(xué)習(xí)記憶障礙模型大鼠海馬及杏仁核內(nèi)。BDNF的表達(dá)降低,針刺可使其升高。表達(dá)BDNF的神經(jīng)元體積也較大,有很長的樹突,最長的可伸展到海馬以外,最多的可觀察到五級分支。
　　 4.2 DM學(xué)習(xí)記憶障礙模型大鼠海馬及杏仁核內(nèi)PKAmRNA的表達(dá)降低,針刺可使升高。
　

9、　 4.3 DM學(xué)習(xí)記憶障礙模型大鼠海馬及杏仁核內(nèi)CREB表達(dá)降低,針刺可使其升高。
　　 4.4針刺可通過調(diào)節(jié)PKA—CREB信號通路促進(jìn)BDNF的合成及分泌,促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生功能,從而可影響學(xué)習(xí)與記憶。這可能是針刺治療老年癡呆的神經(jīng)機(jī)制。
　　 本文的研究結(jié)果證實(shí),DM模型大鼠出現(xiàn)了學(xué)習(xí)記憶障礙,并伴隨有海馬和杏仁核內(nèi)BDNF,PKA,CREB表達(dá)的降低,針刺可使模型大鼠的上述變化得到抑制,通過PKA在海馬區(qū)域增加