日本血吸蟲18kDa天然分子抗原及其候選基因疫苗的研究.pdf

1、目的：篩選和鑒定新的有價值的日本血吸蟲疫苗候選分子，為天然分子多價復合疫苗的制備提供實驗依據(jù)。本論文對日本血吸蟲不同靶分子量大小的天然抗原分子進行了分離純化與鑒定，針對SjAWA18kDa分子抗原進行免疫生化特性研究，并比較了SjWAwA18kDa天然分子抗原及其相關編碼候選基因SJCWLOlDNA免疫小鼠產生的抗血吸蟲病免疫保護效果。 方法：1采用柱層析方法和SDS-PAGE結合凝膠洗脫分離純化日本血吸蟲成蟲(SjAWA)和未

2、成熟蟲卵可溶性抗原(SIEA)，SDS-PAGE結合銀染色、考馬斯亮蘭染色進行分析鑒定。2采用多途徑免疫法制備SjAWA18kDa純化抗原的單特異免疫血清，以此為探針進行免疫學分析。 3將篩選尾蚴cDNA文庫獲得的新基因(編碼18kDa蛋白，命名為SJCWLOl，GENBANK登錄號為AY855919)克隆入真核表達載體pcDNA3，經(jīng)PCR、限制性酶切篩選和鑒定陽性克隆。將pcDNA3／SJCWLOl質粒轉化大腸桿菌DH5 α、大量

3、制備DNA疫苗；將該天然分子抗原編碼候選基因與SjAWA18kDa免疫小鼠，然后經(jīng)腹部皮膚感染40±l條日本血吸蟲尾蚴，45天后剖殺，計算減蟲率和減卵率。采用免疫組化法檢測重組DNA疫苗SJCWLOl在局部肌肉組織中的表達。 結果：l通過柱層析法或SDS-PAGE結合凝膠洗脫得到了五種不同大小血吸蟲分子抗原SjAWAl8kDa,SjAWA26／28kDa,SIEA42kDa，SIEA130kDa，SjAWA14kDa。2成功制備

4、了抗日本血吸蟲18kDa單特異兔血清，SjAWA18kDa與新基因編碼的重組融合蛋白有共同的抗原表位。免疫組化顯示SjAWA18kDa主要定位于成蟲的腸上皮、表皮和實質細胞。 3將SJCWLOl基因亞克隆至pcDNA3，然后，轉化大腸桿菌，大量制備純化的重組質粒DNA(pcDNA3／SJCWLOl)；以此重組DNA和SjAWA18kDa天然分子免疫小鼠，分別獲得了27.6％，30.7％減蟲率，39.5％和50.7％減卵率。免疫組化結果